| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 1 前言 | 第8-17页 |
| ·病毒的形态特征及物理特性 | 第8页 |
| ·寄主范围和表现症状 | 第8-9页 |
| ·病害的发生与分布 | 第9页 |
| ·传毒介体和发病条件 | 第9页 |
| ·病毒基因组的结构和功能 | 第9-11页 |
| ·病毒基因组的变异 | 第11页 |
| ·病毒编码的蛋白及其功能 | 第11-16页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第16-17页 |
| 2 材料和方法 | 第17-30页 |
| ·材料 | 第17-19页 |
| ·病毒分离物 | 第17页 |
| ·载体和菌株 | 第17页 |
| ·引物 | 第17页 |
| ·试剂及酶类 | 第17-19页 |
| ·试验动物 | 第19页 |
| ·主要仪器设备 | 第19页 |
| ·实验方法 | 第19-30页 |
| ·病叶总RNA提取 | 第19页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第19-20页 |
| ·DNA片段的切胶纯化 | 第20-21页 |
| ·克隆操作 | 第21-23页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第23-24页 |
| ·RDV Pns10和Pns11基因的原核表达 | 第24-26页 |
| ·蛋白的SDS-PAGE凝胶电泳检测 | 第26页 |
| ·融合蛋白特异性抗血清的制备及保存 | 第26-27页 |
| ·抗血清效价测定 | 第27-28页 |
| ·抗血清特异性评价 | 第28-29页 |
| ·生物信息学分析 | 第29-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-43页 |
| ·RDV dsRNA的提取及纯化 | 第30页 |
| ·RDV Pns10和Pns11基因RT—PCR扩增结果及回收纯化结果 | 第30-31页 |
| ·重组质粒的筛选和鉴定 | 第31-33页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第33页 |
| ·重组质粒双酶切和目的片段回收结果 | 第33页 |
| ·表达载体pGEX-4T-1的酶切和目的片段回收结果 | 第33页 |
| ·原核表达重组质粒分子鉴定结果 | 第33-35页 |
| ·RDV Pns10和Pns11基因的原核表达 | 第35页 |
| ·Pns10融合蛋白SDS-PAGE分离鉴定结果 | 第35页 |
| ·Pns11融合蛋白SDS-PAGE分离鉴定结果 | 第35页 |
| ·融合蛋白抗血清效价侧定结果 | 第35-38页 |
| ·Western Blot分析结果 | 第38-39页 |
| ·生物信息学分析结果 | 第39-43页 |
| ·蛋白理化性质分析 | 第39-40页 |
| ·蛋白跨膜区预测 | 第40-41页 |
| ·蛋白功能域分析预测 | 第41页 |
| ·蛋白质二级结构预测 | 第41-43页 |
| 4 讨论 | 第43-45页 |
| ·表达引物的设计 | 第43页 |
| ·表达系统和表达载体的选择 | 第43页 |
| ·原核表达条件的优化 | 第43-44页 |
| ·抗血清的制备 | 第44页 |
| ·Western blot检测 | 第44-45页 |
| 小结 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-51页 |
| 附录1 主要试剂与缓冲液的配制 | 第51-55页 |
| 附录2 Pns10蛋白的二级结构预测 | 第55-57页 |
| 致谢 | 第57页 |