| 1 前言 | 第1-26页 |
| ·乳腺生物反应器研究简史 | 第9-10页 |
| ·国外研究概述 | 第9页 |
| ·国内研究概述 | 第9-10页 |
| ·乳腺生物反应器的产业化进展 | 第10-11页 |
| ·国外产业化进展 | 第10-11页 |
| ·国内产业化进展 | 第11页 |
| ·乳腺生物反应器生产重组蛋白的优势 | 第11页 |
| ·动物乳腺生物反应器存在的问题 | 第11-12页 |
| ·动物乳腺生物反应器产业化前景展望 | 第12页 |
| ·乳腺生物反应器表达载体的研究 | 第12-16页 |
| ·构建乳腺表达载体常用的乳蛋白调控序列 | 第12-14页 |
| ·目的基因的选择 | 第14-15页 |
| ·信号肽的选择 | 第15页 |
| ·标记基因的选择 | 第15-16页 |
| ·乳腺表达动物的选择 | 第16页 |
| ·应用乳蛋白基因构建乳腺生物反应器表达载体的发展 | 第16-20页 |
| ·乳腺生物反应器质粒表达载体 | 第16-17页 |
| ·乳腺生物反应器人工染色体表达载体 | 第17-18页 |
| ·乳腺生物反应器基因打靶表达载体 | 第18-19页 |
| ·乳腺生物反应器表达载体发展展望 | 第19-20页 |
| ·动物细胞体外培养简介 | 第20-21页 |
| ·原代细胞的获得及培养 | 第20页 |
| ·传代培养 | 第20页 |
| ·细胞的冻存和复苏 | 第20-21页 |
| ·动物细胞的应用 | 第21页 |
| ·脂质体介导法转染细胞简介 | 第21-25页 |
| ·阳性脂质体的组成 | 第22页 |
| ·阳性脂质体介导基因转染的作用机制 | 第22-23页 |
| ·影响阳性脂质体介导基因转染效率的因素 | 第23-24页 |
| ·阳性脂质体介导转染法的优点及应用前景 | 第24-25页 |
| ·研究目的及意义 | 第25-26页 |
| 2 实验一 硫矿硫化叶菌的培养及lacS 基因的克隆 | 第26-36页 |
| ·实验材料 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-32页 |
| ·硫矿硫化叶菌的培养 | 第27页 |
| ·硫矿硫化叶菌基因组DNA 的提取 | 第27-28页 |
| ·pUC19/lacS 克隆载体的构建及鉴定 | 第28-32页 |
| ·结果与分析 | 第32-36页 |
| ·基因组DNA 的琼脂糖凝胶电泳 | 第32页 |
| ·PCR 扩增产物的琼脂糖凝胶电泳 | 第32-33页 |
| ·菌液快速PCR 扩增产物琼脂糖凝胶电泳分析 | 第33页 |
| ·快速提取pUC19/lacS 质粒琼脂糖凝胶电泳分析 | 第33-34页 |
| ·pUC19/lacS 质粒的酶切鉴定 | 第34页 |
| ·pUC19/lacS 质粒的PCR 鉴定 | 第34页 |
| ·pUC19/lacS 质粒的测序及分析 | 第34-36页 |
| 3 实验二嗜热菌糖苷酶基因牛乳腺特异表达载体的构建 | 第36-55页 |
| ·实验材料 | 第37页 |
| ·实验方法 | 第37-42页 |
| ·牛基因组DNA 的提取 | 第37页 |
| ·PCR 扩增 | 第37-39页 |
| ·DNA 的酶切 | 第39页 |
| ·DNA 的回收 | 第39-40页 |
| ·连接与转化 | 第40页 |
| ·乳腺特异表达载体的构建 | 第40-41页 |
| ·阳性单菌落的初步筛选 | 第41页 |
| ·阳性质粒的酶切和PCR 鉴定 | 第41-42页 |
| ·牛β-乳球蛋白基因5′端调控序列的测定 | 第42页 |
| ·结果与分析 | 第42-48页 |
| ·制备的牛血基因组DNA 和PCR 扩增产物的电泳分析 | 第42页 |
| ·质粒pMD/BLG 的鉴定分析 | 第42-44页 |
| ·质粒pBL 的鉴定分析 | 第44-45页 |
| ·质粒pIN 的鉴定分析 | 第45-46页 |
| ·乳腺特异表达载体pBLI 的鉴定分析 | 第46-47页 |
| ·BLG 序列分析 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-52页 |
| ·小结 | 第52-55页 |
| 4 实验三牛胎儿成纤维细胞系的建立及性别鉴定 | 第55-62页 |
| ·实验材料 | 第56页 |
| ·实验方法 | 第56-59页 |
| ·细胞系的建立 | 第56-57页 |
| ·PCR 鉴定胎牛性别的研究 | 第57-59页 |
| ·结果与分析 | 第59-60页 |
| ·牛胎儿成纤维细胞体外生长特征 | 第59页 |
| ·传代细胞生长曲线的测定 | 第59-60页 |
| ·PRC 方法判断牛胎儿成纤维细胞的性别 | 第60页 |
| ·讨论 | 第60-61页 |
| ·小结 | 第61-62页 |
| 5 实验四牛胎儿成纤维细胞的基因转染 | 第62-68页 |
| ·实验材料 | 第62页 |
| ·实验方法 | 第62-65页 |
| ·bFF 对G418 敏感度的研究 | 第62-63页 |
| ·pBLI 载体的制备、线性化及提纯 | 第63-64页 |
| ·牛胎儿成纤维细胞的准备和脂质体介导的转染 | 第64页 |
| ·转基因牛胎儿成纤维细胞的筛选和纯化 | 第64-65页 |
| ·转染效率的测定 | 第65页 |
| ·结果与分析 | 第65-67页 |
| ·G418 对bFF 的筛选 | 第65页 |
| ·pBLI 载体的线性化及回收定量 | 第65-66页 |
| ·荧光显微镜下观察转基因bFF | 第66页 |
| ·DNA 浓度对转染效率的影响 | 第66页 |
| ·脂质体浓度对转染效率的影响 | 第66-67页 |
| ·讨论 | 第67-68页 |
| ·关于不同DNA 剂量对GFP 转染阳性率的影响 | 第67页 |
| ·脂质体量对转染阳性率的影响 | 第67页 |
| ·G418 浓度对筛选效果的影响 | 第67-68页 |
| ·小结 | 第68页 |
| 6 结论 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-77页 |
| 附录 | 第77-83页 |
| 作者简介 | 第83页 |
