水稻转基因受体系统的建立及农杆菌介导法转基因的初步探讨
| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-12页 |
| Ⅰ 文献综述：水稻转基因技术研究进展 | 第12-40页 |
| 1 水稻转化受体的研究进展 | 第12-13页 |
| ·原生质体再生系统 | 第12页 |
| ·愈伤组织再生系统 | 第12-13页 |
| ·幼嫩子房,花粉,卵细胞,幼胚 | 第13页 |
| 2 转基因水稻的转化方法研究进展 | 第13-18页 |
| ·基因枪法 | 第13-14页 |
| ·农杆菌介导法 | 第14-15页 |
| ·根癌农杆菌介导的外源基因转移的原理 | 第14页 |
| ·根癌农杆菌介导水稻的应用研究 | 第14-15页 |
| ·PEG转化法 | 第15-16页 |
| ·电激法 | 第16页 |
| ·花粉管通道法 | 第16-17页 |
| ·脂质体转化法 | 第17页 |
| ·激光微束介导转化法 | 第17页 |
| ·低能离子束介导法 | 第17-18页 |
| 3 外源基因在水稻改良上的应用 | 第18-26页 |
| ·水稻抗虫性改良 | 第18-21页 |
| ·苏云金杆菌杀虫结晶蛋白基因(Bt毒蛋白基因) | 第19页 |
| ·豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI) | 第19页 |
| ·植物凝集(Lectin) | 第19-21页 |
| ·水稻品质改良育种 | 第21-23页 |
| ·淀粉品质改良 | 第21页 |
| ·蛋白质改良 | 第21-22页 |
| ·水稻微量营养改良 | 第22-23页 |
| ·抗病转基因水稻 | 第23-24页 |
| ·抗除草剂转基因水稻 | 第24-25页 |
| ·抗逆育种 | 第25页 |
| ·创造雄性不育系 | 第25页 |
| ·水稻分蘖系统梯度品系 | 第25-26页 |
| ·高光效转基因水稻 | 第26页 |
| 4 选择标记基因及报告基因的应用现状 | 第26-28页 |
| ·常用的选择标记基因 | 第26-27页 |
| ·培育无选择标记转基因植物 | 第27-28页 |
| ·报告基因 | 第28页 |
| 5 转基因植物的检测方法 | 第28-31页 |
| ·靶基因的检测 | 第28-31页 |
| ·DNA水平上的检测 | 第29页 |
| ·基于PCR检测的方法 | 第29页 |
| ·Southern杂交技术 | 第29页 |
| ·其它的检测方法 | 第29页 |
| ·RNA水平上的检测 | 第29-30页 |
| ·Northern杂交 | 第30页 |
| ·斑点印迹和狭线杂交 | 第30页 |
| ·原位杂交(ISH) | 第30页 |
| ·蛋白质水平上的检测 | 第30-31页 |
| ·Western杂交 | 第30-31页 |
| ·ELISA检测 | 第31页 |
| ·报告基因的表达检测 | 第31页 |
| 6 转基因沉默 | 第31-35页 |
| ·转基因沉默的机理 | 第31-33页 |
| ·位置效应 | 第32页 |
| ·转录水平的基因沉默 | 第32页 |
| ·转录后水平的基因沉默 | 第32-33页 |
| ·解决转基因沉默的策略 | 第33-35页 |
| ·选择单拷贝转基因 | 第33页 |
| ·去甲基化 | 第33-34页 |
| ·在转基因的侧翼接上MAR序列或SAR序列 | 第34页 |
| ·合理利用增强子 | 第34页 |
| ·在构建外源基因载体时启动子的选择 | 第34-35页 |
| 7 转基因植物安全问题 | 第35-37页 |
| ·转基因食品的安全问题 | 第35-36页 |
| ·转基因植物的环境安全问题 | 第36-37页 |
| ·杂草问题 | 第36页 |
| ·基因漂流 | 第36-37页 |
| ·害虫产生抗性 | 第37页 |
| 8 转基因水稻面临的问题 | 第37-38页 |
| ·转化技术不完善 | 第37-38页 |
| ·组织培养过程引起遗传变异 | 第38页 |
| ·外源基因的位置效应 | 第38页 |
| 9 立题思想 | 第38-40页 |
| Ⅱ 材料和方法 | 第40-48页 |
| 1 实验材料 | 第40-42页 |
| ·供试品种 | 第40页 |
| ·质粒及菌种 | 第40-41页 |
| ·试剂的配制 | 第41-42页 |
| ·受体系统建立中的常用抗生素,激素及生长调节剂 | 第41页 |
| ·水稻转化培养基 | 第41-42页 |
| ·细菌培养基 | 第42页 |
| 2 水稻转基因受体系统的建立 | 第42-45页 |
| ·外植体培养方法 | 第42-43页 |
| ·材料的选取与培养 | 第42页 |
| ·培养条件 | 第42页 |
| ·观察与统计方法 | 第42-43页 |
| ·试验设计 | 第43-45页 |
| ·不同灭菌组合对种胚的影响 | 第43页 |
| ·诱导培养基碳源实验 | 第43-44页 |
| ·不同琼脂浓度对水稻培养愈伤组织诱导率的影响 | 第44-45页 |
| ·脯氨酸对愈伤组织的影响 | 第45页 |
| 3 水稻基因转化实验方法 | 第45-48页 |
| ·水稻基因转化操作步骤 | 第45-48页 |
| ·工程菌的活化 | 第45页 |
| ·浸染 | 第45-46页 |
| ·共培养 | 第46页 |
| ·选择压的确定 | 第46页 |
| ·脱菌与筛选 | 第46页 |
| ·分化与生根 | 第46页 |
| ·转基因水稻苗的分子生物学检测 | 第46-48页 |
| Ⅲ 结果与分析 | 第48-53页 |
| 1 不同灭菌组合对种胚的影响 | 第48-49页 |
| 2 诱导培养基碳源实验 | 第49-50页 |
| 3 不同琼脂浓度对水稻培养愈伤组织诱导率的影响 | 第50页 |
| 4 脯氨酸对愈伤组织的影响 | 第50-51页 |
| 5 不同外植体胚性愈伤组织的诱导效果 | 第51-52页 |
| 6 潮霉素筛选压的确定 | 第52页 |
| 7 转基因植株的获得 | 第52-53页 |
| Ⅳ 讨论 | 第53-59页 |
| 1 转基因高效受体系统的优化 | 第53-56页 |
| ·转化受体的选择 | 第53页 |
| ·组织培养条件 | 第53-54页 |
| ·污染问题 | 第54-55页 |
| ·愈伤组织的褐化问题 | 第55页 |
| ·继代次数对分化率的影响 | 第55-56页 |
| 2 影响水稻农杆菌转化体系的因素 | 第56-59页 |
| ·水稻的基因型 | 第56页 |
| ·农杆菌的种类,生长状态和浓度 | 第56-57页 |
| ·共培养时间对转化率的影响 | 第57页 |
| ·干燥处理 | 第57-58页 |
| ·本实验获得转化植株太少的原因 | 第58-59页 |
| Ⅴ 参考文献 | 第59-64页 |
| 图版 | 第64-65页 |
| 硕士期间发表的学术文章 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
