| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 一 前言 | 第9-17页 |
| 1：地中海贫血 | 第9-10页 |
| 2：β珠蛋白的基因结构 | 第10-11页 |
| 3：MEL细胞 | 第11-12页 |
| 4：β地中海贫血的治疗现状 | 第12页 |
| 5：β地中海贫血基因治疗 | 第12-17页 |
| ·β珠蛋白基因表达调控机制 | 第13-14页 |
| ·β地中海贫血基因治疗的策略 | 第14-17页 |
| 二 实验材料与仪器 | 第17-21页 |
| 1：菌株、质粒和细胞 | 第17页 |
| 2：主要试剂及培养基的配制 | 第17-20页 |
| 3：仪器与设备 | 第20-21页 |
| 三 技术路线 | 第21-22页 |
| 四 实验方法 | 第22-38页 |
| 1：LCR及β~(41／42)突变基因结构图 | 第22页 |
| 2：pcDNA3.1-LCR-β~(41／42)重组质粒的构建图 | 第22-24页 |
| 3：LCR的克隆 | 第24-30页 |
| ·人β地中海贫血β~(41／42)突变全血基因组DNA制备 | 第24-25页 |
| ·引物设计 | 第25页 |
| ·PCR扩增 | 第25-27页 |
| ·LCR目的片段与pcDNA3.1(-)质粒载体的双酶切 | 第27-28页 |
| ·LCR目的片段与pcDNA3.1(-)质粒载体的连接 | 第28页 |
| ·pcDNA3.1-LCR重组质粒的转化、筛选、鉴定和大量制备 | 第28-30页 |
| 4：β~(41／42)基因的克隆 | 第30-32页 |
| ·引物设计 | 第30页 |
| ·PCR扩增 | 第30-31页 |
| ·β~(41／42)基因目的片段与pcDNA3.1-LCR质粒载体的双酶切 | 第31-32页 |
| ·β~(41／42)基因目的片段与pcDNA3.1-LCR质粒载体的连接 | 第32页 |
| ·pcDNA3.1-LCR-β~(41／42)重组质粒的转化、筛选、鉴定和大量制备 | 第32页 |
| 5：MEL细胞的脂质体转染 | 第32-35页 |
| ·MEL细胞的培养和传代 | 第32-33页 |
| ·转染用的重组质粒DNA的制备、纯化及定量 | 第33页 |
| ·重组质粒转染MEL细胞(阳离子脂质体介导转染法) | 第33-35页 |
| 6：MELβ~(41／42)细胞株的诱导表达及检测 | 第35-38页 |
| ·诱导 | 第35页 |
| ·检测 | 第35-38页 |
| 五 结果分析 | 第38-47页 |
| 1：LCR及β~(41／42)基因的克隆 | 第38-43页 |
| ·人β地中海贫血β~(41／42)突变全血基因组DNA制备 | 第38页 |
| ·LCR及β~(41／42)基因的扩增 | 第38-39页 |
| ·重组质粒的PCR和酶切鉴定 | 第39-42页 |
| ·基因座控制区LCR的测序 | 第42页 |
| ·β~(41／42)基因的测序 | 第42-43页 |
| 2：MEL细胞的培养 | 第43页 |
| 3：抗性克隆的获得 | 第43-45页 |
| ·G418筛选浓度的确定 | 第43-44页 |
| ·抗性克隆的筛选 | 第44-45页 |
| 4：MELβ~(41／42)总RNA的提取 | 第45页 |
| 5：RT-PCR检测人β地贫β~(41／42)突变基因在MEL细胞中的表达 | 第45-47页 |
| 六 讨论 | 第47-51页 |
| 七 结论 | 第51-52页 |
| 八 附录 | 第52-64页 |
| 附录一： LCR基因全长测序结果 | 第52-55页 |
| 附录二：β~(41/43)基因全长测序结果 | 第55-56页 |
| 附录三：LCR测序图谱 | 第56-61页 |
| 附录四：β~(41/43)突变基因测序图谱 | 第61-64页 |
| 九 参考文献 | 第64-71页 |
| 十 英文缩略词表 | 第71-73页 |
| 十一 致谢 | 第73页 |
