中文摘要 | 第1-6页 |
英文摘要 | 第6-9页 |
符号说明 | 第9-11页 |
前言 | 第11-13页 |
技术路线 | 第13-14页 |
第一部分 弓形虫主要表面抗原P30单价基因疫苗的构建 | 第14-27页 |
材料与方法 | 第14-21页 |
材料 | 第14-15页 |
方法 | 第15-21页 |
目的基因的获取 | 第15-19页 |
目的基因与表达载体pcDNA3.1(-)的连接 | 第19-21页 |
结果 | 第21-24页 |
P30基因PCR结果 | 第21页 |
P30 TA-cloning的酶切鉴定 | 第21页 |
表达重组子pcDNA3.1-P30的构建及酶切鉴定 | 第21页 |
测序结果 | 第21-24页 |
讨论 | 第24-27页 |
第二部分 弓形虫主要表面抗原P30与融合蛋白P30-ROP2在Hela细胞中的表达 | 第27-38页 |
材料与方法 | 第27-33页 |
材料 | 第27-28页 |
方法 | 第28-33页 |
重组质粒pcDNA3.1-P30、pcDNA3.1-P30-ROP2转染Hela细胞 | 第28-30页 |
抽提细胞总RNA | 第30-31页 |
RT-PCR | 第31-33页 |
结果 | 第33-36页 |
β-actin基因PCR结果 | 第33页 |
P30基因PCR结果 | 第33页 |
P30-ROP2基凼PCR结果 | 第33-36页 |
讨论 | 第36-38页 |
第三部分 P30单基因及P30-ROP2复合基因疫苗对小鼠的免疫效果 | 第38-57页 |
材料与方法 | 第38-49页 |
材料 | 第38-41页 |
方法 | 第41-49页 |
质粒pcDNA3.1及pcDNA3.1-P30、pcDNA3.1-P30-ROP2的大量制备 | 第41-42页 |
核酸疫苗的免疫接种 | 第42-43页 |
体液免疫指标测定 | 第43-44页 |
细胞免疫指标测定 | 第44-47页 |
弓形虫速殖子攻击感染 | 第47-48页 |
实验数据分析 | 第48-49页 |
结果 | 第49-53页 |
抗体应答ELISA结果 | 第49页 |
血清IFN-γ测定结果 | 第49-50页 |
血清IL-4测定结果 | 第50页 |
淋巴细胞转化实验测定结果 | 第50-51页 |
NK细胞杀伤实验测定结果 | 第51页 |
淋巴细胞亚群分型结果 | 第51-52页 |
弓形虫RH株速殖子攻击感染后免疫小鼠生存时间 | 第52-53页 |
讨论 | 第53-57页 |
小结 | 第57-58页 |
附图 | 第58-62页 |
参考文献 | 第62-65页 |
致谢 | 第65-70页 |
攻读学位期间发表的论文目录 | 第70-65页 |