中文摘要 | 第1-8页 |
English Abstract | 第8-12页 |
前言 | 第12-17页 |
英文缩略语(Abbreviation) | 第17-19页 |
第一部分:新基因MR-1的克隆和生物信息学分析 | 第19-33页 |
一:材料与方法 | 第19-25页 |
1.材料部分 | 第19-21页 |
2.方法部分 | 第21-25页 |
二:实验结果与讨论 | 第25-33页 |
1.人源MR-1基因(hMR-1)的克隆及核酸序列分析 | 第25-27页 |
2.hMR-1蛋白结构域分析 | 第27-29页 |
3.小鼠源MR-1基因(mMR-1)cDNA的获得 | 第29-30页 |
4.大鼠源MR-1基因(rMR-1)cDNA的获得 | 第30页 |
5.不同种属MR-1基因的同源比较分析 | 第30-33页 |
第二部分:hMR-1的表达谱分析 | 第33-46页 |
一:材料与方法 | 第33-35页 |
1.材料部分 | 第33-34页 |
2.方法部分 | 第34-35页 |
二:实验结果与讨论 | 第35-46页 |
1.hMR-1基因的Northern Blot分析 | 第35-36页 |
2.hMR-1基因的定量PCR和RT-PCR分析 | 第36-39页 |
3.SAGEmap分析hMR-1基因表达谱 | 第39-43页 |
4.hMR-1基因不同转录本分析 | 第43-46页 |
第三部分:hMR-1蛋白的表达及多克隆抗体制备 | 第46-64页 |
一:材料与方法 | 第46-53页 |
1.材料部分 | 第46-51页 |
2.方法部分 | 第51-53页 |
二:实验结果与讨论 | 第53-64页 |
1.在大肠杆菌中初步探索hMR-1表达 | 第53-54页 |
2.在pET24系统中hMR-1表达规律 | 第54-59页 |
3.hMR-1表达蛋白的纯化 | 第59-60页 |
4.MR1多克隆抗体制备 | 第60-61页 |
5.hMR1抗体的Western检测 | 第61-62页 |
6.结果讨论 | 第62-64页 |
第四部分:hMR-1蛋白功能分析 | 第64-82页 |
一:材料与方法 | 第64-71页 |
1.材料部分 | 第64-68页 |
2.方法部分 | 第68-71页 |
二:实验结果与讨论 | 第71-82页 |
1.酵母双杂交筛选获得MR1相互作用蛋白 | 第71-75页 |
2.蛋白体外结合实验验证酵母双杂交结果 | 第75-76页 |
3.MR-1与相互作用蛋白作用部位的分析 | 第76-77页 |
4.MR-1与MRIP-1不同部位相互作用的分析 | 第77-80页 |
5.结果讨论 | 第80-82页 |
第五部分:MR-1在人肿瘤组织及细胞中的功能分析 | 第82-93页 |
一:材料与方法 | 第82-87页 |
1:材料部分 | 第82-84页 |
2:方法部分 | 第84-87页 |
二:实验结果与讨论 | 第87-93页 |
1.定量RT-PCR分析MR-1在肝癌组织中表达 | 第87-88页 |
2.肿瘤细胞MR-1高表达稳定细胞株的构建 | 第88-90页 |
3.Northern Bot鉴定MR1的表达 | 第90-91页 |
4.MR-1高表达稳定细胞系的细胞增殖 | 第91页 |
5.MR-1高表达与其它基因的关系 | 第91-93页 |
第六部分:MR-1在大鼠心肌肥大动物模型中的表达 | 第93-99页 |
一:材料与方法 | 第93-95页 |
1.材料部分 | 第93-94页 |
2.方法部分 | 第94-95页 |
二:实验结果与讨论 | 第95-99页 |
1.腹主动脉结扎心肌肥大动物模型的建立 | 第95-96页 |
2.MR-1在大鼠心肌肥大模型中的表达 | 第96-98页 |
3.结果讨论 | 第98-99页 |
第七部分:RNA干扰MR-1在心肌肥大细胞中的表达 | 第99-108页 |
一:材料与方法 | 第99-101页 |
1.材料部分 | 第99-100页 |
2.方法部分 | 第100-101页 |
二:实验结果与讨论 | 第101-108页 |
1.MR-1基因RNA干扰靶点设计及载体构建 | 第101-103页 |
2.筛选针对rMR-1的RNA干扰载体 | 第103-104页 |
3.RNA干扰MR-1对心肌原代细胞肥大的影响 | 第104-107页 |
4.结果讨论 | 第107-108页 |
第八部分:MR-1转基因小鼠家系建立 | 第108-117页 |
一:材料与方法 | 第108-110页 |
1.材料部分 | 第108-109页 |
2.方法部分 | 第109-110页 |
二:实验结果与讨论 | 第110-117页 |
1.获得首建F1代hMR-1转基因小鼠 | 第110-114页 |
2.繁殖获得F2代hMR-1转基因小鼠 | 第114页 |
3.繁殖获得F3代hMR-1转基因小鼠 | 第114-117页 |
结论 | 第117-118页 |
参考文献 | 第118-122页 |
论文综述 | 第122-129页 |
致谢 | 第129-130页 |
附录 | 第130-150页 |
(一).MR-1基因在199个SAGE库中转录水平 | 第130-132页 |
(二).与MR1具有相互作用AD质粒测序 | 第132-140页 |
(三).基因芯片检测结果 | 第140-149页 |
(四).博士在读期间申请专利及发表和在投学术论文 | 第149-150页 |
(五).参加会议和发表文摘 | 第150页 |