| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要 | 第7-16页 |
| 第一章 对虾白斑综合症病毒研究进展 | 第16-32页 |
| ·前言 | 第16页 |
| ·白斑综合症病毒的病毒粒子结构和基因组结构 | 第16-19页 |
| ·对虾白斑综合症概况 | 第16页 |
| ·白斑综合症病毒粒子的形态学 | 第16-18页 |
| ·白斑综合症病毒的基因组结构 | 第18-19页 |
| ·白斑综合症病毒的分类学地位 | 第19页 |
| ·白斑综合症病毒对宿主的感染和流行病学 | 第19-21页 |
| ·白斑综合症病毒感染的宿主范围 | 第19-20页 |
| ·白斑综合症病毒的组织嗜性 | 第20页 |
| ·WSSV的组织病理学和细胞病理学 | 第20页 |
| ·白斑综合症病毒感染的过程、感染方式与感染模型 | 第20-21页 |
| ·白斑综合症病毒的结构蛋白及其功能研究 | 第21-26页 |
| ·WSSV的主要囊膜蛋白 | 第22-23页 |
| ·VP28 | 第22页 |
| ·VP26(p22) | 第22-23页 |
| ·VP19 | 第23页 |
| ·WSSV的主要核衣壳蛋白 | 第23-24页 |
| ·VP24 | 第23-24页 |
| ·VP15 | 第24页 |
| ·其他已经鉴定的结构蛋白 | 第24-25页 |
| ·VP35 | 第24-25页 |
| ·VP466 | 第25页 |
| ·VP281 | 第25页 |
| ·胶原蛋白 | 第25页 |
| ·WSSV结构蛋白的糖基化修饰研究 | 第25-26页 |
| ·WSSV的转录和复制相关的蛋白 | 第26-27页 |
| ·WSSV启动子序列特征 | 第27页 |
| ·对虾白斑病毒基因组的比较 | 第27-28页 |
| ·WSSV与细胞凋亡 | 第28-29页 |
| ·WSSV的检测 | 第29-31页 |
| ·PCR检测 | 第29-30页 |
| ·核酸杂交检测 | 第30页 |
| ·用特异性抗体检测WSSV | 第30-31页 |
| ·其他检测技术 | 第31页 |
| ·结语与展望 | 第31-32页 |
| 第二章 综述：噬菌体展示技术 | 第32-64页 |
| ·噬菌体展示技术的基本原理 | 第32-37页 |
| ·丝状噬菌体的生物学特征 | 第32-34页 |
| ·丝状噬菌体的生活周期 | 第34-35页 |
| ·噬菌体展示的基本原理 | 第35-37页 |
| ·其他噬菌体展示系统 | 第37-40页 |
| ·T4噬菌体展示系统 | 第37-38页 |
| ·λ噬菌体展示系统 | 第38-40页 |
| ·T7噬菌体展示系统 | 第40页 |
| ·噬菌体展示文库的构建 | 第40-42页 |
| ·噬菌体展示多肽文库的构建 | 第41页 |
| ·噬菌体展示抗体文库的构建 | 第41-42页 |
| ·噬菌体展示文库的筛选方法 | 第42-46页 |
| ·以分子为筛选靶标 | 第42-43页 |
| ·以单一蛋白质为筛选靶标 | 第42-43页 |
| ·以核酸为筛选靶标 | 第43页 |
| ·以复合分子为筛选靶标 | 第43页 |
| ·以细胞作为筛选靶标 | 第43-44页 |
| ·以组织或器官作为筛选靶标 | 第44页 |
| ·一些新的筛选方法 | 第44-46页 |
| ·以DNA为基础的筛选方法(DNA-based selection) | 第44-45页 |
| ·反复淘洗和封闭法(interactive panning and blocking, IPAB) | 第45页 |
| ·选择性感染噬菌体法(selectively infective phage, SIP) | 第45页 |
| ·亲和力捕获筛选法(selection by avidity capture, SAC) | 第45-46页 |
| ·噬菌体展示系统的应用 | 第46-56页 |
| ·噬菌体抗体库技术与抗体工程 | 第46-49页 |
| ·蛋白质工程 | 第49-53页 |
| ·酶工程 | 第50-51页 |
| ·新蛋白质的发现和蛋白质的改造 | 第51-53页 |
| ·新受体和配体的发现 | 第51-52页 |
| ·蛋白质的定向设计和空间结构改造 | 第52-53页 |
| ·蛋白质之间的互作研究 | 第53页 |
| ·用于新药筛选和疾病的诊断治疗 | 第53-56页 |
| ·用作诊断试剂的开发 | 第54页 |
| ·用于传染病和肿瘤的防治 | 第54-55页 |
| ·用作疾病的基因治疗载体 | 第55页 |
| ·用于疫苗的开发和研制 | 第55-56页 |
| ·噬菌体展示系统的拓展——其他表面展示系统 | 第56-62页 |
| ·杆状病毒表面展示系统 | 第56-59页 |
| ·细菌表面展示系统 | 第59-60页 |
| ·酵母表面展示系统 | 第60-61页 |
| ·体外展示技术 | 第61-62页 |
| ·共价展示技术(covalentdisplay technique, CDT) | 第61-62页 |
| ·多聚体展示技术(polysome display) | 第62页 |
| ·RNA-多肽融合系统(RNA-peptide fusions) | 第62页 |
| ·结语 | 第62-63页 |
| ·本论文的研究背景和研究目的 | 第63-64页 |
| 第三章 研究方法 | 第64-73页 |
| ·质粒DNA的制备和纯化 | 第64-65页 |
| ·质粒DNA的小量制备 | 第64页 |
| ·质粒DNA的大量制备 | 第64-65页 |
| ·DNA的溴化乙锭—氯化铯浮力密度梯度离心纯化 | 第65页 |
| ·限制性酶消化反应 | 第65页 |
| ·载体去磷酸化 | 第65-66页 |
| ·从琼脂糖凝胶中回收DNA | 第66-67页 |
| ·玻璃奶法 | 第66页 |
| ·低熔点琼脂糖法 | 第66-67页 |
| ·DNA连接反应 | 第67页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第67-68页 |
| ·氯化钙法 | 第67页 |
| ·电转化法 | 第67-68页 |
| ·病毒的增殖、分离和提纯 | 第68-69页 |
| ·毒源制备及病毒在螯虾中增殖 | 第68页 |
| ·病毒的提取与纯化 | 第68-69页 |
| ·原代虾细胞培养 | 第69页 |
| ·噬菌体展示技术 | 第69-71页 |
| ·文库的淘洗 | 第69-70页 |
| ·文库噬菌体的拯救 | 第70页 |
| ·ELISA和测序 | 第70-71页 |
| ·空斑减少中和试验 | 第71页 |
| ·膜蛋白的抽提 | 第71-72页 |
| ·Western blot分析 | 第72页 |
| ·激光共聚焦显微镜 | 第72-73页 |
| 第四章 对虾的原代细胞培养及白斑病毒对原代细胞的感染 | 第73-82页 |
| ·引言 | 第73页 |
| ·材料与方法 | 第73-75页 |
| ·材料 | 第73页 |
| ·研究方法 | 第73-75页 |
| ·毒源制备及病毒在螯虾中增殖 | 第73-74页 |
| ·病毒的提取与纯化 | 第74页 |
| ·原代虾细胞培养 | 第74页 |
| ·TCID50测定 | 第74-75页 |
| ·MTT法检测细胞存活 | 第75页 |
| ·电镜负染 | 第75页 |
| ·病毒感染细胞的超薄切片电镜观察 | 第75页 |
| ·研究结果 | 第75-80页 |
| ·类淋巴组织可成功地培养对虾原代细胞 | 第75-76页 |
| ·TCID50法对病毒的滴定结果 | 第76-77页 |
| ·MTT法滴定结果 | 第77-79页 |
| ·电镜负染结果 | 第79页 |
| ·细胞超薄切片显示病毒存在于感染细胞内 | 第79-80页 |
| ·讨论 | 第80-82页 |
| 第五章 囊膜蛋白VP28在WSSV感染中的功能鉴定 | 第82-103页 |
| ·引言 | 第82-84页 |
| ·材料 | 第84-85页 |
| ·试剂 | 第84页 |
| ·载体 | 第84页 |
| ·引物 | 第84-85页 |
| ·菌株和实验动物 | 第85页 |
| ·试验方法 | 第85-90页 |
| ·病毒的生产和纯化 | 第85页 |
| ·重组质粒的构建 | 第85-87页 |
| ·重组蛋白的表达和纯化 | 第87页 |
| ·VP28多克隆抗体的制备 | 第87-88页 |
| ·原代虾细胞培养 | 第88页 |
| ·病毒感染实验 | 第88页 |
| ·VP28-EGFP融合蛋白与细胞结合试验 | 第88页 |
| ·膜蛋白的抽提和Western blot分析 | 第88-89页 |
| ·激光共聚焦显微镜观察VP28-EGFP融合蛋白与细胞的结合 | 第89页 |
| ·竞争性ELISA | 第89-90页 |
| ·病毒感染和抗体阻断试验 | 第90页 |
| ·研究结果 | 第90-99页 |
| ·重组表达质粒pET28+28和pET28+28G的鉴定 | 第90-92页 |
| ·重组蛋白VP28和VP28-EGFP的表达和纯化 | 第92-93页 |
| ·VP28与对虾细胞膜的结合能力与pH有关 | 第93-95页 |
| ·VP28从细胞膜向细胞质的运输 | 第95-97页 |
| ·VP28与WSSV竞争性结合对虾原代细胞 | 第97-98页 |
| ·VP28多克隆抗体阻断了WSSV对细胞的感染 | 第98-99页 |
| ·讨论 | 第99-103页 |
| 第六章 与对虾白斑病毒特异性结合的噬菌体展示单链抗体的淘洗 | 第103-116页 |
| ·引言 | 第103-104页 |
| ·材料与方法 | 第104-108页 |
| ·实验材料 | 第104-105页 |
| ·病毒来源 | 第104页 |
| ·试验动物 | 第104页 |
| ·文库、质粒和菌体 | 第104页 |
| ·试剂等材料 | 第104-105页 |
| ·实验方法 | 第105-108页 |
| ·病毒的增殖、分离和提纯 | 第105页 |
| ·噬菌体抗体展示文库的扩增 | 第105页 |
| ·将噬菌体展示文库转化成噬菌体形式 | 第105页 |
| ·文库噬菌体的滴定 | 第105-106页 |
| ·在免疫管中筛选(panning) | 第106页 |
| ·辅助噬菌体KM13的扩增、培养和滴定 | 第106-107页 |
| ·文库噬菌体的拯救 | 第107页 |
| ·单克隆phage ELISA | 第107-108页 |
| ·抗体基因片段的序列测定 | 第108页 |
| ·结果 | 第108-114页 |
| ·WSSV特异性抗体的亲和筛选 | 第108-109页 |
| ·阳性噬菌体展示抗体的特异性评价 | 第109页 |
| ·抗体的序列及其分析 | 第109-114页 |
| ·讨论 | 第114-116页 |
| 研究总结 | 第116-118页 |
| 参考文献 | 第118-140页 |
| 已发表和待发表的论文 | 第140-141页 |
| 致谢 | 第141-142页 |
