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携带hTRAIL的复制型溶瘤腺病毒治疗恶性肿瘤的研究

第一章 复制型溶瘤病毒研究第1-39页
   ·前言第15页
   ·基因突变是肿瘤发生的基础第15-18页
   ·肿瘤基因治疗第18-19页
   ·复制型溶瘤病毒治疗第19-37页
     ·理想的OV特征及来源第20-21页
     ·OV杀灭肿瘤细胞的机制第21-22页
     ·OV特异性增殖的机制第22-29页
     ·OV的临床试验第29-34页
     ·OV技术进展第34-37页
   ·靶向基因-病毒治疗第37页
   ·结论第37-39页
第二章 TNF超家族及TRAIL研究第39-67页
   ·TNF和TNFR超家族概述第39-53页
     ·TNF及其受体TNFR第42-44页
     ·FasL及其受体Fas第44-47页
     ·TWEAK及其受体Fn14第47页
     ·BLys及其受体第47-48页
     ·LIGHT及其受体第48页
     ·RANKL及受体第48-49页
     ·人淋巴毒素第49-50页
     ·TNF配体和受体超家族讨论总结第50-53页
   ·TRAIL第53-59页
     ·TRAIL第53-55页
     ·TRAIL的受体第55-57页
     ·TRAIL及其受体介导的信号转导通路第57-59页
   ·常细胞逃避TRAIL杀伤作用的机制第59-60页
     ·诱骗受体的保护作用第59页
     ·FLIP的抑制作用第59-60页
     ·IAP的作用第60页
     ·IL-1的作用第60页
   ·TRAIL的旁观者效应第60-61页
   ·有关TRAIL的毒性问题第61-63页
   ·TRAIL在肿瘤治疗中的研究现状第63-66页
     ·TRAIL蛋白直接用于肿瘤治疗第63-64页
     ·TRAIL蛋白的联合治疗第64-66页
   ·结语第66-67页
第三章 靶向基因-病毒与5-FU联合的抗恶性结肠癌效应※第67-101页
   ·前言第68-70页
   ·实验材料与方法第70-88页
     ·菌株、细胞及试剂第70-71页
     ·质粒第71-74页
     ·病毒和实验动物第74页
     ·质粒DNA的制备第74-76页
     ·从琼脂糖凝胶中回收DNA第76-77页
     ·酶切与连接第77页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化第77-79页
     ·同源重组法构建腺病毒第79页
     ·病毒的空斑纯化、大量制备与滴度测定:第79-81页
     ·抽提病毒DNA(QIAamp DNA Blood Mini Kit)第81页
     ·斑点杂交(Dot blotting)第81-82页
     ·RT-PCR第82-83页
     ·Western blot第83-84页
     ·细胞存活率和CPE(细胞病变效应)实验第84-85页
     ·流式细胞术检测亚二倍体峰第85页
     ·动物实验第85-86页
     ·血清学测定第86页
     ·免疫组化检测第86页
     ·透射电镜观察第86-88页
   ·研究结果第88-99页
     ·ZD55-hTRAIL的构建和鉴定第88页
     ·肿瘤细胞对ZD55-hTRAIL和ONYX015敏感性比较第88-91页
     ·ZD55-hTRAIL与5-FU的协同/增强作用第91-93页
     ·ZD55-hTRAIL单用或联合5-FU对荷瘤小鼠的肿瘤生长抑制第93-95页
     ·ZD55-hTRAIL与5-FU联合治疗抑制肿瘤生长的证据第95-99页
   ·讨论第99-101页
第四章 携带hTRAIL和k5的溶瘤腺病毒对肿瘤的双基因治疗第101-121页
   ·前言第102-104页
   ·实验材料与方法第104-107页
     ·菌株、质粒、细胞和试剂第104页
     ·病毒第104页
     ·病毒感染、制备、纯化及滴定第104页
     ·流式细胞术检测第104-105页
     ·细胞增殖实验第105页
     ·病毒报告基因分析第105页
     ·细胞存活率和CPE(细胞病变效应)实验第105页
     ·动物试验第105-106页
     ·RT-PCR分析第106页
     ·TUNEL检测DNA片段化第106-107页
     ·TRAIL免疫组化检测第107页
     ·统计学分析第107页
   ·研究结果第107-118页
     ·ZD55-hTRAIL对肿瘤细胞的特异性极其抗肿瘤效应第107-109页
     ·ZD55-hTRAIL在动物水平上的抗肿瘤效应第109-112页
     ·靶向双基因-病毒治疗肿瘤的效果第112-115页
     ·ZD55-hTRAIL和Ad-k5的靶向双基因-病毒治疗肿瘤的机制第115-118页
   ·讨论第118-121页
第五章 分泌型TRAIL选择性杀伤肿瘤细胞的初步实验第121-135页
   ·前言第122-123页
   ·材料与方法第123-128页
     ·菌种、细胞株及质粒第123页
     ·酶类及主要试剂第123页
     ·TRAIL受体的RT-PCR第123-124页
     ·重组真核表达载体构建第124-125页
     ·重组真核表达载体转染COS7细胞第125页
     ·肿瘤细胞MTT的检测第125页
     ·ELISA(双抗体夹心法)检测第125-127页
     ·统计学处理第127-128页
   ·研究结果第128-133页
     ·结直肠肿瘤细胞中TRAIL受体的转录第128-130页
     ·携带TRAIL的分泌型重组真核表达载体的构建第130-131页
     ·TRAIL在COS7.0细胞中的表达第131-132页
     ·分泌型真核表达载体表达的TRAIL的抗肿瘤效应第132-133页
   ·讨论第133-135页
参考文献第135-161页
研究总结第161-162页
博士研究生期间发表和待发表的文章第162-163页
致谢第163-164页

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