| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-15页 |
| ·课题目的和意义 | 第10-11页 |
| ·MAGE抗原与肿瘤疫苗 | 第11-12页 |
| ·肿瘤抗原提呈 | 第12-14页 |
| ·论文各部分的主要内容 | 第14-15页 |
| 第二章 MAGE-A3基因的克隆 | 第15-28页 |
| ·方法及步骤 | 第16-19页 |
| ·引物设计 | 第16页 |
| ·Mel526细胞的复苏与培养 | 第16页 |
| ·Mel526细胞总RNA提取 | 第16页 |
| ·逆转录合成cDNA | 第16-17页 |
| ·PCR扩增MAGE-A3基因 | 第17页 |
| ·PCR产物纯化 | 第17页 |
| ·PCR产物与pGEM-T-easy vector连接 | 第17页 |
| ·重组子转化 | 第17-18页 |
| ·质粒提取 | 第18页 |
| ·pMAGE-A3／T酶切鉴定 | 第18页 |
| ·pMAGE-A3／T测序鉴定 | 第18-19页 |
| ·结果 | 第19-27页 |
| ·引物设计 | 第19页 |
| ·Mel 526细胞培养 | 第19-20页 |
| ·Mel526细胞总RNA提取 | 第20-21页 |
| ·PCR扩增MAGE-A3基因 | 第21-22页 |
| ·PCR产物与pGEM-T-easy vector连接及酶切鉴定 | 第22-25页 |
| ·测序结果 | 第25-26页 |
| ·测序结果与参考序列同源性比较 | 第26-27页 |
| ·讨论 | 第27-28页 |
| 第三章 T739小鼠肺癌LA795 MAGE-A3稳定表达模型建立 | 第28-57页 |
| ·方法与步骤 | 第29-35页 |
| ·PCR扩增MAGE-A3开放读码框 | 第29页 |
| ·pMAGE-3／EGFP载体构建 | 第29-30页 |
| ·LA795细胞复苏与培养 | 第30页 |
| ·LA795细胞G418最低耐受试验 | 第30页 |
| ·pMAGE-3／EGFP质粒提取 | 第30-31页 |
| ·pMAGE-3／EGFP质粒电穿孔转染LA795细胞 | 第31页 |
| ·筛选稳定表达细胞 | 第31-32页 |
| ·筛选单克隆化稳定表达细胞亚株 | 第32页 |
| ·96孔板高通量鉴定MAGE-A3基因的表达 | 第32-33页 |
| ·RT-PCR鉴定MAGE-A3基因转录 | 第33页 |
| ·MAGE-A3与LA795(MAGE-A3)细胞基因组整合鉴定 | 第33-34页 |
| ·LA795(MAGE-A3)细胞体外性状检测 | 第34页 |
| ·LA795(MAGE-A3)细胞体内致瘤性试验 | 第34-35页 |
| ·结果 | 第35-52页 |
| ·MAGE-A3 ORF扩增 | 第35-37页 |
| ·pMAGE-3／EGFP载体构建 | 第37-39页 |
| ·LA795培养 | 第39页 |
| ·LA795细胞G418最低耐受试验 | 第39-40页 |
| ·LA795细胞最适低渗耐受试验 | 第40-41页 |
| ·LA795细胞电转染最适电转参数确定 | 第41-42页 |
| ·LA795电转染DNA剂量表达关系 | 第42-43页 |
| ·pMAGE-3／EGFP质粒电穿孔转染LA795细胞 | 第43-44页 |
| ·96孔板单克隆筛选培养 | 第44-45页 |
| ·96孔板PCR法筛选稳定表达克隆 | 第45-46页 |
| ·LA795(MAGE-A3)稳定表达克隆获得 | 第46-47页 |
| ·MAGE-A3和EGFP基因与宿主基因组整合 | 第47-48页 |
| ·LA795(MAGE-A3)细胞MAGE-A3基因表达 | 第48-49页 |
| ·LA795(MAGE-A3)细胞体外增殖速度 | 第49-50页 |
| ·LA795(MAGE-A3)细胞克隆形成试验 | 第50-51页 |
| ·LA795(MAGE-A3)同系小鼠接种试验 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52-57页 |
| 第四章 基因修饰重组MAGE-A3肿瘤核酸疫苗的构建及试验研究 | 第57-98页 |
| ·材料与方法 | 第58-63页 |
| ·预制件构建 | 第58-59页 |
| ·疫苗载体构建 | 第59-60页 |
| ·疫苗载体制备 | 第60-61页 |
| ·DNA疫苗免疫 | 第61页 |
| ·移植瘤接种与观察 | 第61页 |
| ·血清细胞因子水平检测 | 第61-62页 |
| ·质粒疫苗内毒素检测 | 第62页 |
| ·DNA疫苗与宿主基因组整合检测 | 第62-63页 |
| ·结果 | 第63-83页 |
| ·引物设计 | 第63-65页 |
| ·预制件构建 | 第65-70页 |
| ·疫苗载体构建 | 第70-75页 |
| ·核酸疫苗的质量监控 | 第75-76页 |
| ·报告基因表达检测 | 第76-77页 |
| ·基因修饰MAGE-A3基因疫苗对肿瘤生长影响 | 第77-79页 |
| ·基因修饰MAGE-A3基因因苗免疫后血清细胞因子水平 | 第79-82页 |
| ·DNA疫苗与基因组整合情况 | 第82-83页 |
| ·讨论 | 第83-98页 |
| ·抗肿瘤免疫应答过程 | 第83-85页 |
| ·肿瘤抗原提呈和T细胞识别 | 第85-87页 |
| ·DNA疫苗激活CTL反应的机制 | 第87-91页 |
| ·重组MAGE-A3肿瘤核酸疫苗的免疫效研究 | 第91页 |
| ·基因修饰对MAGE-A3肿瘤核酸疫苗免疫效应的影响 | 第91-94页 |
| ·重组核酸疫苗的质量控制核安全性 | 第94-96页 |
| ·前景与展望 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-105页 |
| 综述: MAGE基因研究状况和进展 | 第105-118页 |
