| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 序言 | 第8-24页 |
| 一、甘蔗黄叶病概况 | 第8-15页 |
| 1. 甘蔗产业概况 | 第8-9页 |
| 2. 甘蔗病害概况 | 第9-10页 |
| 3. 甘蔗黄叶病概况 | 第10-15页 |
| 二、RNA沉默现象 | 第15-19页 |
| 1. 转录后基因沉默 | 第15-16页 |
| 2. RNAi介导的RNA沉默 | 第16-19页 |
| 三、甘蔗转基因转化概况 | 第19-24页 |
| 1. 植物转基因方法概况 | 第19-21页 |
| 2. 植物抗病毒基因工程 | 第21-23页 |
| 3. 黄症病毒科CP基因转基因研究 | 第23-24页 |
| 立题依据和技术路线 | 第24-26页 |
| 一、研究目的及意义 | 第24页 |
| 二、研究内容 | 第24页 |
| 三、技术路线 | 第24-26页 |
| 实验方法与步骤 | 第26-40页 |
| 一、甘蔗黄叶病毒CP基因的分离 | 第26-30页 |
| 1. 实验样品采集 | 第26页 |
| 2. 样品分子检测 | 第26-28页 |
| 3. CP基因构建载体 | 第28-30页 |
| 4. CP基因生物信息学分析 | 第30页 |
| 二、植物载体的构建 | 第30-35页 |
| 1. CP基因片段正义链和反义链的克隆与鉴定 | 第30-31页 |
| 2. CP基因片段的正义链和反义链连接载体 | 第31-32页 |
| 3. CP基因ihpRNA表达载体构建和鉴定 | 第32-33页 |
| 4. 植物表达载体i19-CP-ZF-3300构建图 | 第33-35页 |
| 三、农杆菌菌液和甘蔗转化材料的准备 | 第35-37页 |
| 1. 植物表达载体转化农杆菌 | 第35-36页 |
| 2. 甘蔗外植体处理 | 第36-37页 |
| 四、农杆菌转化甘蔗 | 第37-38页 |
| 1. 农杆菌菌液的准备 | 第37页 |
| 2. 转化材料的准备 | 第37页 |
| 3. 农杆菌侵染甘蔗愈伤和分化小苗 | 第37页 |
| 4. 幼嫩植株的筛选和定植 | 第37-38页 |
| 五、转基因甘蔗的分子检测 | 第38-40页 |
| 1. DNA水平检测 | 第38-39页 |
| 2. RNA水平检测 | 第39-40页 |
| 实验结果与分析 | 第40-49页 |
| 一、甘蔗黄叶病毒CP基因的分离 | 第40-42页 |
| 1. 大田样品总RNA的提取 | 第40页 |
| 2. 样品RT-PCR | 第40页 |
| 3. CP基因测序 | 第40-41页 |
| 4. 系统发育树 | 第41-42页 |
| 二、CP基因ihpRNA表达载体构建和鉴定 | 第42-44页 |
| 1. CP基因片段正反向序列的克隆和鉴定 | 第42页 |
| 2. CP基因片段正反向序列的测序 | 第42页 |
| 3. CP基因片段正义链与中间载体的连接 | 第42-43页 |
| 4. CP基因片段反义链与中间载体的连接 | 第43页 |
| 5. ihpRNA表达载体的构建 | 第43-44页 |
| 三、目的基因遗传转化甘蔗 | 第44-46页 |
| 1. 农杆菌目的基因检测 | 第44-45页 |
| 2. 甘蔗转基因植株的培育与筛选 | 第45-46页 |
| 四、转基因植株的分子检测 | 第46-49页 |
| 1. 甘蔗叶片DNA的小量提取 | 第46-47页 |
| 2. 转基因植株Bar基因PCR检测 | 第47页 |
| 3. 转基因植株CP基因片段正向序列PCR检测 | 第47页 |
| 4. 转基因植株总RNA的提取 | 第47-48页 |
| 5. 转基因植株CP基因片段反向序列RT-PCR扩增 | 第48-49页 |
| 讨论与结论 | 第49-53页 |
| 一、甘蔗黄叶病毒CP基因的克隆 | 第49页 |
| 二、RNAi植物表达载体的构建 | 第49-50页 |
| 三、甘蔗抗性苗的筛选 | 第50-51页 |
| 四、甘蔗转基因的问题 | 第51-52页 |
| 五、本研究结论 | 第52-53页 |
| 附录 | 第53-55页 |
| 一、主要甘蔗培养基 | 第53-54页 |
| 二、常见英文缩写词 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 后记 | 第61页 |