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两种快速构建重组杆状病毒的方法的建立及棉铃虫病毒基因组中orf107和orf135的鉴定和初步功能分析

1 文献综述第1-32页
   ·杆状病毒分子生物学概述第10-21页
     ·杆状病毒的分类地位第10-11页
     ·杆状病毒的形态结构第11页
     ·杆状病毒的生活史第11-12页
     ·杆状病毒的细胞系及杆状病毒感染细胞所引起的细胞病理变化第12-14页
     ·杆状病毒功能基因组学研究概述第14-20页
     ·杆状病毒的进化第20-21页
   ·杆状病毒功能基因组学研究的方法学概述第21-27页
     ·基因功能的预测第21-23页
     ·由功能到基因的研究方法第23-24页
     ·通过基因表达产物的定位来获得基因的功能信息第24-25页
     ·利用基因突变分析的方法研究杆状病毒基因的功能第25-26页
     ·基因的超量表达功能分析第26页
     ·在杆状病毒分子生物学研究中一些高通量研究方法的可能的应用第26-27页
   ·杆状病毒分子生物学研究的实践意义第27-28页
     ·杆状病毒生物杀虫剂第27-28页
     ·杆状病毒表达系统第28页
     ·杆状病毒表面展示系统第28页
     ·杆状病毒基因治疗载体第28页
   ·本实验研究的背景及前期工作的总结第28-30页
     ·棉花生产及其病虫害防治第28-29页
     ·棉铃虫病毒的早期研究第29页
     ·棉铃虫病毒分子生物学研究阶段第29-30页
   ·本实验的目的和意义第30-32页
2 材料与方法第32-42页
   ·材料第32-35页
     ·大肠杆菌菌株第32页
     ·昆虫细胞系第32-33页
     ·病毒和Bacmid第33页
     ·质粒第33-34页
     ·引物第34页
     ·培养基第34-35页
     ·酶、化学试剂和试剂盒第35页
     ·抗生素第35页
   ·方法第35-42页
     ·大肠杆菌中质粒的提取方法第35-36页
     ·大肠杆菌中Bacmid的提取法第36页
     ·大肠杆菌转化子的快速检测第36页
     ·DNA限制性酶切片段和PCR产物的回收第36-37页
     ·电转化用感受态细胞的制备和电转化第37页
     ·基因的原核表达和SDS-PAGE分析第37页
     ·以大肠杆菌为宿主的蛋白质的纯化第37-38页
     ·抗血清的制备第38-39页
     ·Western杂交第39页
     ·HaSNPV多角体的制备第39-40页
     ·杆状病毒对昆虫细胞的感染和扩增第40页
     ·HaSNPV DNA及Bacmid DNA对昆虫细胞的转染第40-41页
     ·PCR(聚合酶链式反应)第41页
     ·杆状病毒序列的分析第41页
     ·切片制备和电子显微镜的观察第41-42页
3 结果与讨论第42-90页
   ·一种有效的在大肠杆菌中构建同源重组杆状病毒的方法的建立第42-52页
     ·引言第42页
     ·载体的构建和线型片段的制各第42-44页
     ·以BW25113(Pkd46)为宿主的同源重组第44-46页
     ·重组子的鉴定第46-48页
     ·缺失v-cath基因的重组HaSNPV的功能鉴定第48-50页
     ·小结第50-52页
   ·一种以PCR产物直接构建同源重组杆状病毒的方法第52-58页
     ·引言第52页
     ·orf135基因缺失型重组病毒的构建第52-54页
     ·重组Bacmid的鉴定第54-57页
     ·小结第57-58页
   ·棉铃虫病毒基因组随机插入突变文库的构建及突变子的定向筛选第58-66页
     ·引言第58页
     ·转座子TnMax13插入突变文库的构建第58-60页
     ·特定基因突变的PCR筛选和鉴定第60-64页
     ·特定基因的插入突变子的测序鉴定第64页
     ·转座子随机突变子文库的进一步应用及应注意的问题第64-65页
     ·小结第65-66页
   ·orf107的鉴定和功能分析第66-81页
     ·引言第66页
     ·orf107在棉铃虫病毒基因组中的位置及其相邻基因在整个基因组中的分布特征第66-67页
     ·orf107的启动子,终止子和一级结构序列的特征第67-69页
     ·orf107的功能结构域分析及其在细胞中的定位信息的预测第69-70页
     ·orf107的相似性比较分析第70页
     ·orf107的表达分析第70-73页
     ·orf107的突变病毒的构建第73-76页
     ·orf107的突变分析第76-79页
     ·小结第79-81页
   ·棉铃虫病毒基因组中orf135的鉴定和功能分析第81-90页
     ·引言第81页
     ·orf135在棉铃虫病毒基因组中的位置及其序列特征第81-83页
     ·orf135功能的软件分析第83-84页
     ·orf135在HzAM1细胞中表达情况的研究第84-87页
     ·orf135的缺失分析第87-89页
     ·小结第89-90页
4 总结第90-92页
5 参考文献第92-102页
6 已发表和撰写的论文第102-103页
7 致谢第103-104页

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