| 第一章 文献综述 | 第1-27页 |
| 1．1 植物冻害及其抗冻性 | 第9-16页 |
| 1．1．1 植物冻害 | 第9页 |
| 1．1．2 植物抗冻生理 | 第9-13页 |
| 1．1．2．1 避冻和耐冻 | 第9-10页 |
| 1．1．2．2 过冷和胞外结冰 | 第10-11页 |
| 1．1．2．3 膜伤害理论 | 第11-13页 |
| 1．1．3 植物抗冻分子生物学 | 第13-14页 |
| 1．1．3．1 冷驯化诱导蛋白（CAIP） | 第13-14页 |
| 1．1．3．2 冷调节基因（CoR基因） | 第14页 |
| 1．1．3．3 抗冻蛋白 | 第14页 |
| 1．1．4 植物抗冻基因工程 | 第14-16页 |
| 1．1．4．1 脂肪酸去饱和代谢关键酶基因 | 第14-15页 |
| 1．1．4．2 超氧化物歧化酶（SOD）基因 | 第15页 |
| 1．1．4．3 糖类基因 | 第15-16页 |
| 1．1．4．4 调节蛋白基因 | 第16页 |
| 1．1．4．5 抗冻蛋白基因 | 第16页 |
| 1．2 抗冻蛋白 | 第16-23页 |
| 1．2．1 AFP特性 | 第16页 |
| 1．2．2 鱼类抗冻蛋白 | 第16-18页 |
| 1．2．3 昆虫抗冻蛋白 | 第18页 |
| 1．2．4 植物抗冻蛋白 | 第18-19页 |
| 1．2．5 抗冻蛋白基因 | 第19-20页 |
| 1．2．6 抗冻蛋白活性的增强 | 第20页 |
| 1．2．7 抗冻蛋白的用途 | 第20-21页 |
| 1．2．8 异源抗冻蛋白在细菌中的表达 | 第21-22页 |
| 1．2．9 异源抗冻蛋白在酵母菌中的表达 | 第22页 |
| 1．2．10 抗冻蛋白在植物抗冻生理中的作用 | 第22页 |
| 1．2．11 抗冻蛋白在植物抗冻基因工程中的应用 | 第22-23页 |
| 1．3 番茄基因转化 | 第23-25页 |
| 1．4 本研究的目的和意义 | 第25-27页 |
| 第二章 正文 | 第27-54页 |
| 2．1 材料与方法 | 第27-34页 |
| 2．1．1 胡萝卜抗冻蛋白基因的克隆 | 第27-30页 |
| 2．1．1．1 胡萝卜品种 | 第27页 |
| 2．1．1．2 胡萝卜基因组DNA的提取 | 第27-28页 |
| 2．1．1．3 PCR（Polymerase Chain Reaction） | 第28页 |
| 2．1．1．4 目的片段的纯化回收 | 第28页 |
| 2．1．1．5 目的片段的酶切鉴定 | 第28页 |
| 2．1．1．6 克隆载体的构建 | 第28-29页 |
| 2．1．1．7 感受态细菌的制备 | 第29页 |
| 2．1．1．8 感受态细菌的转化 | 第29页 |
| 2．1．1．9 重组质粒的鉴定 | 第29-30页 |
| 2．1．1．10 目的基因的序列测定 | 第30页 |
| 2．1．2 胡萝卜抗冻蛋白基因植物表达载体的构建 | 第30-31页 |
| 2．1．3 农杆菌转化 | 第31-32页 |
| 2．1．3．1 转化 | 第31页 |
| 2．1．3．2 鉴定 | 第31-32页 |
| 2．1．4 番茄再生体系的建立 | 第32-33页 |
| 2．1．4．1 番茄品种：ZF | 第32页 |
| 2．1．4．2 激素 | 第32页 |
| 2．1．4．3 培养基 | 第32页 |
| 2．1．4．4 生芽培养基激素组合筛选 | 第32页 |
| 2．1．4．5 生根培养基生长素浓度筛选 | 第32-33页 |
| 2．1．4．6 无菌苗培养 | 第33页 |
| 2．1．5 番茄遗传转化体系的建立及胡萝卜afp基因的导入 | 第33-34页 |
| 2．1．5．1 抗生素 | 第33页 |
| 2．1．5．2 卡那霉素浓度试验 | 第33页 |
| 2．1．5．3 头孢噻肟钠敏感性试验 | 第33页 |
| 2．1．5．4 外植体预培养 | 第33页 |
| 2．1．5．5 农杆菌浸染液制备 | 第33页 |
| 2．1．5．6 浸染及其培养 | 第33页 |
| 2．1．5．7 生芽筛选培养 | 第33页 |
| 2．1．5．8 生根筛选培养 | 第33页 |
| 2．1．5．9 移栽 | 第33-34页 |
| 2．1．5．10 PCR检测 | 第34页 |
| 2．2 结果与分析 | 第34-50页 |
| 2．2．1 胡萝卜抗冻蛋白基因的克隆 | 第34-41页 |
| 2．2．1．1 PCR | 第34页 |
| 2．2．1．2 目的片段的酶切鉴定 | 第34-35页 |
| 2．2．1．3 克隆载体的构建 | 第35页 |
| 2．2．1．4 重组质粒的鉴定 | 第35-36页 |
| 2．2．1．5 目的基因的序列测定 | 第36-41页 |
| 2．2．2 胡萝卜抗冻蛋白基因植物表达载体的构建 | 第41页 |
| 2．2．2．1 植物表达载体的构建 | 第41页 |
| 2．2．2．2 植物表达载体的鉴定 | 第41页 |
| 2．2．3 农杆菌的转化 | 第41-43页 |
| 2．2．3．1 转化 | 第41-43页 |
| 2．2．3．2 鉴定 | 第43页 |
| 2．2．4 番茄再生体系的建立 | 第43-45页 |
| 2．2．4．1 生芽培养基激素组合筛选 | 第43-45页 |
| 2．2．4．2 生根培养基生长素浓度筛选 | 第45页 |
| 2．2．5 番茄遗传转化体系的建立及胡萝卜afp基因的导入 | 第45-50页 |
| 2．2．5．1 卡那霉素浓度试验 | 第45-46页 |
| 2．2．5．2 头孢噻肟钠敏感性试验 | 第46页 |
| 2．2．5．3 农杆菌稀释倍数和侵染时间试验 | 第46页 |
| 2．2．5．4 胡萝卜afp基因的导入 | 第46-50页 |
| 2．2．5．5 转基因幼苗的PCR检测 | 第50页 |
| 2．3 讨论 | 第50-54页 |
| 2．3．1 胡萝卜afp的克隆策略 | 第50-51页 |
| 2．3．2 胡萝卜var sativus Hoffm Deutschl与var autumn King afp的异同 | 第51页 |
| 2．3．3 胡萝卜afp植物表达载体的构建策略 | 第51-52页 |
| 2．3．4 农杆菌的直接转化法 | 第52页 |
| 2．3．5 转化农杆菌的鉴定方法 | 第52页 |
| 2．3．6 细胞分裂素、生长素与芽诱导 | 第52-53页 |
| 2．3．7 卡那霉素的使用浓度 | 第53页 |
| 2．3．8 外植体的褐变 | 第53-54页 |
| 第三章 结论 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-71页 |
| 作者简介 | 第71页 |
