| 摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要 | 第7-11页 |
| 前言 | 第11-13页 |
| 材料与方法 | 第13-21页 |
| 一、胰腺癌组织来源 | 第13页 |
| 二、动物饲养 | 第13页 |
| 三、建立人胰腺癌细胞系(PC-7,PC-48) | 第13页 |
| 四、细胞系的鉴定 | 第13-14页 |
| 五、~3H-TdR掺入试验 | 第14页 |
| 六、外源性EGF及其抗体和EGFR抗体对PC-7细胞及裸鼠移植瘤生长影响的研究 | 第14-15页 |
| 七、分子杂交 | 第15-16页 |
| (一) 细胞总RNA提取及Northern blot转移 | 第15页 |
| (二) cDNA探针的制备 | 第15-16页 |
| 1．感受态细胞(conpetent)的制备及转化 | 第15-16页 |
| 2．cDNA探针的扩增及鉴定 | 第16页 |
| 3．cDNA探针的标记 | 第16页 |
| 4. RNA-DNA杂交(Northern blot hybridization) | 第16页 |
| 八、DNA重组 | 第16-19页 |
| (一) 逆转录病毒载体 | 第16页 |
| (二) EGF质粒 | 第16页 |
| (三) EGFR质粒 | 第16-19页 |
| (四) 连接反应 | 第19页 |
| (五) 转化、扩增及鉴定 | 第19页 |
| 九、DNA转染细胞系 | 第19-20页 |
| (一) 重组体的纯化 | 第19页 |
| (二) 重组体的包被(利用磷酸钙沉淀法) | 第19-20页 |
| (三) 转化人胰腺癌细胞系(polybrene法) | 第20页 |
| 十、表达反义EGF及EGFR RNA的逆转录病毒载体对PC-7细胞及裸鼠移植瘤生长影响的研究 | 第20-21页 |
| 实验结果 | 第21-33页 |
| 第一部分 细胞系的建立及鉴定 | 第21-22页 |
| (一)、细胞系的形态学特点 | 第21页 |
| (二)、细胞系的生物学行为 | 第21-22页 |
| 1．生长特性 | 第21页 |
| 2．染色体分析及流式细胞DNA含量分析(Flow Cytometry) | 第21页 |
| 3．软琼脂培养 | 第21页 |
| 4．裸鼠致瘤性及浸润转移 | 第21-22页 |
| 5．免疫组化 | 第22页 |
| 6．PC-7细胞膜表面EGFR的~(125)I-EGF结合试验 | 第22页 |
| 7．内源性EGF及EGFR mRNA的表达(Northern blot hybridization) | 第22页 |
| 第二部分 外源性EGF及其抗体和EGFR抗体对PC-7细胞及裸鼠移植瘤生长的影响 | 第22-23页 |
| (一)、对培养细胞生长的影响 | 第22-23页 |
| 1．细胞计数 | 第22页 |
| 2．~3H-TdR掺入试验 | 第22-23页 |
| (二)、对裸鼠移植瘤生长的影响 | 第23页 |
| 1．裸鼠移植瘤生长曲线 | 第23页 |
| 2．c-myc癌基因检测 | 第23页 |
| 第三部分 反义EGF及反义EGFR对PC-7细胞及裸鼠移植瘤生长的影响 | 第23-33页 |
| (一)、表达反义EGF及EGFR逆转录病毒载体的构建与鉴定 | 第23-24页 |
| (二)、病毒滴度的测定 | 第24页 |
| (三)、反义EGF及反义EGFR对细胞生长的影响 | 第24页 |
| 1．细胞计数 | 第24页 |
| 2．~3H-TdR掺入 | 第24页 |
| 3．软琼脂集落形成 | 第24页 |
| 4．内源性EGF及EGFR mRNA的表达(Northern blot hybridization) | 第24页 |
| (四)、经反义EGF及反义EGFR转染后PC-7细胞的致瘤性研究 | 第24-25页 |
| (五)、反义EGF及反义EGFR对PC-7裸鼠移植瘤生长的影响 | 第25-33页 |
| 讨论 | 第33-39页 |
| 结论 | 第39-40页 |
| 附图 | 第40-71页 |
| 参考文献 | 第71-82页 |
| 综述 | 第82-114页 |
| 参考文献 | 第102-114页 |
| 缩写词 | 第114-115页 |
| 鸣谢 | 第115页 |
