| 第一部分 用GAP启动子在毕赤酵母中的组成型表达鼠羧肽酶B | 第1-43页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 前言 | 第13-15页 |
| 第一章 材料与方法 | 第15-27页 |
| ·实验材料 | 第15-19页 |
| ·材料 | 第15页 |
| ·试剂 | 第15-16页 |
| ·引物设计与合成 | 第16页 |
| ·主要仪器 | 第16-17页 |
| ·主要培养基 | 第17页 |
| ·主要溶液 | 第17-18页 |
| ·层析柱及纯化介质 | 第18-19页 |
| ·实验方法 | 第19-27页 |
| ·GAP启动子基因的克隆与回收 | 第19-20页 |
| ·质粒pPIC9k-proCPB的提取 | 第20-21页 |
| ·pGAP片段和质粒pPIC9k-proCPB的双酶切 | 第21-22页 |
| ·质粒pPIC9k-proCPB和pGAP片段双酶切产物的回收 | 第22页 |
| ·双酶切回收产物的连接 | 第22页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态的制备 | 第22页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌DH5α | 第22-23页 |
| ·菌落PCR筛选阳性克隆 | 第23页 |
| ·质粒PCR鉴定及测序 | 第23页 |
| ·巴斯德毕赤酵母GS115电转化与鉴定 | 第23-25页 |
| ·重组子pGAPK-proCPB/GS115表达与分析 | 第25-27页 |
| 第二章 实验结果 | 第27-36页 |
| ·重组质粒构建示意图 | 第27-29页 |
| ·重组质粒的构建 | 第29-32页 |
| ·毕赤酵母电击转化与鉴定 | 第32-33页 |
| ·毕赤酵母重组子在摇瓶中的表达 | 第33-35页 |
| ·毕赤酵母重组子的表达筛选 | 第33页 |
| ·毕赤酵母重组子摇瓶培养时生长曲线的绘制 | 第33-34页 |
| ·不同时间对目的蛋白表达的影响 | 第34-35页 |
| ·目的蛋白表达产物的纯化 | 第35-36页 |
| 第三章 讨论 | 第36-40页 |
| ·重组质粒的构建 | 第36页 |
| ·巴斯德毕赤酵母菌的转化 | 第36-37页 |
| ·巴斯德毕赤酵母pAOX1系统与pGAP系统 | 第37-38页 |
| ·巴斯德毕赤酵母组成型表达 | 第38-39页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第39-40页 |
| 总结 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-43页 |
| 第二部分 蛇毒纤溶酶Alfimeprase在毕赤酵母中的表达及多抗制备 | 第43-69页 |
| 摘要 | 第43-44页 |
| Abstract | 第44-46页 |
| 第一章 前言 | 第46-48页 |
| 第二章 材料与方法 | 第48-58页 |
| ·实验材料 | 第48-52页 |
| ·材料 | 第48页 |
| ·试剂 | 第48-49页 |
| ·引物设计与合成 | 第49页 |
| ·主要仪器 | 第49-50页 |
| ·主要培养基 | 第50页 |
| ·实验动物 | 第50-51页 |
| ·主要溶液 | 第51-52页 |
| ·实验方法 | 第52-58页 |
| ·重组质粒pPIC9-Alfimeprase的提取 | 第52页 |
| ·重组质粒PCR鉴定 | 第52-53页 |
| ·毕赤酵母GS115电击转化与鉴定 | 第53-54页 |
| ·酵母重组子pPIC9-Alfimeprase的诱导表达 | 第54-55页 |
| ·Alfimeprase多克隆抗体的制备 | 第55-58页 |
| 第三章 实验结果 | 第58-63页 |
| ·重组质粒pPIC9-Alfimeprase图谱 | 第58页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定及酶切 | 第58-59页 |
| ·巴斯德毕赤酵母的电击转化与鉴定 | 第59-60页 |
| ·毕赤酵母重组子的诱导表达 | 第60-61页 |
| ·Alfimeprase包涵体蛋白的纯化 | 第61页 |
| ·Alfimeprase包涵体的纯化样品浓度测定 | 第61-62页 |
| ·Alfimeprase多抗效价测定 | 第62-63页 |
| 第四章 讨论 | 第63-66页 |
| ·Alfimeprase在大肠杆菌表达系统中的表达 | 第63页 |
| ·Alfimeprase在巴斯德毕赤酵母中pAOX1系统中的表达 | 第63-65页 |
| ·Alfimeprase鼠多克隆抗体的制备 | 第65-66页 |
| 总结 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-69页 |
| 附录 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
