| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 插图及附表清单 | 第14-15页 |
| 縮略词 | 第15-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-37页 |
| ·Werner综合症是研究衰老与肿瘤相关性的最佳模型 | 第16-24页 |
| ·衰老与肿瘤的相关性 | 第16-19页 |
| ·Werner早老综合症与端粒 | 第19-21页 |
| ·G5代Wrn~(-/-)mTerc~(-/-)WS小鼠ALT肿瘤模型 | 第21-23页 |
| ·ALT肿瘤——一种端粒酶阴性的肿瘤 | 第23-24页 |
| ·p53突变促进ALT肿瘤的形成 | 第24-28页 |
| ·癌症中常见的p53突变 | 第24-25页 |
| ·突变p53的功能获得(Gain of function,GOF)、功能缺失(Lossof function,LOF)以及负显性抑制(DN) | 第25-27页 |
| ·p53突变促进ALT肿瘤形成 | 第27-28页 |
| ·抑癌基因p53与原癌基因Ras在肿瘤发生中的相互作用 | 第28-30页 |
| ·Ras原癌基因与肿瘤发生 | 第28-29页 |
| ·Ras与p53的突变协同促进肿瘤的发生 | 第29-30页 |
| ·应对p53突变的肿瘤治疗策略现状 | 第30-32页 |
| ·恢复突变p53功能的治疗策略 | 第30-31页 |
| ·重新表达野生型p53的治疗策略 | 第31-32页 |
| ·本研究的主要内容及意义 | 第32-37页 |
| ·p53~(N236S)是在WS MEF细胞产生的ALT肿瘤中发现的p53突变 | 第32-34页 |
| ·研究p53~(N236S)功能改变及其与癌基因Ras协同作用的重要意义 | 第34-37页 |
| 第二章 p53~(N236S)的功能丢失(LOF) | 第37-51页 |
| ·材料与方法 | 第37-44页 |
| ·Western blot | 第37-40页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第40-41页 |
| ·细胞培养及载体构建 | 第41页 |
| ·p53~(N236S)载体转染 | 第41-42页 |
| ·免疫荧光染色 | 第42-43页 |
| ·p53~(-/-)MEF细胞基因型的确定 | 第43-44页 |
| ·实验仪器 | 第44-45页 |
| ·结果与分析 | 第45-48页 |
| ·p53S与DNA分子结合能力减弱 | 第45-47页 |
| ·在三株形成肿瘤的G5mTerc~(--)Wrn~(--)细胞中p53S高表达 | 第47页 |
| ·p53S转录活性丢失 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-51页 |
| 第三章 在p53~(--)细胞中外源表达p53~(N236S)与Ras协同促进肿瘤形成的机理研究 | 第51-76页 |
| ·材料与方法 | 第51-62页 |
| ·p53~(--)小鼠胚胎成纤维细胞系的建立 | 第51-52页 |
| ·细胞系与细胞培养 | 第52-54页 |
| ·Ras~(G12V)载体转染 | 第54页 |
| ·Western blot | 第54-55页 |
| ·染色体核型分析 | 第55页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第55-57页 |
| ·免疫荧光染色 | 第57页 |
| ·流式细胞术检测细胞周期 | 第57-58页 |
| ·PNA-荧光原位杂交检测端粒信号 | 第58-59页 |
| ·SCID小鼠皮下注射 | 第59-60页 |
| ·肿瘤组织细胞培养 | 第60页 |
| ·BrdU掺入法检测细胞的增殖能力 | 第60-61页 |
| ·Annexin V-PI凋亡检测 | 第61-62页 |
| ·实验仪器 | 第62-63页 |
| ·结果与分析 | 第63-74页 |
| ·p53~(--)MFE细胞基因型的确定 | 第63页 |
| ·将p53S和H-Ras~(G12V)转染到p53~(-/-)MEF细胞中 | 第63页 |
| ·外源表达的p53S在细胞核中高表达 | 第63-65页 |
| ·p53S与H-Ras~(G12V)协同促进细胞的增殖以及肿瘤的形成 | 第65-68页 |
| ·p53S与H-Ras~(G12V)协同促进细胞的基因组不稳定 | 第68-71页 |
| ·p53S不会影响端粒的结构 | 第71-72页 |
| ·p53S与H-Ras~(G12V)协同作用的分子机制 | 第72-74页 |
| ·讨论 | 第74-76页 |
| 第四章 内源性表达的p53~(N236S)与Ras促进肿瘤的机理研究 | 第76-94页 |
| ·材料与方法 | 第76-81页 |
| ·p53S小鼠胚胎成纤维细胞系 | 第76-78页 |
| ·p53S MEF细胞基因型的确定 | 第78-80页 |
| ·衰老相关的β半乳糖苷酶染色 | 第80-81页 |
| ·加阿霉素处理细胞 | 第81页 |
| ·实验仪器 | 第81-82页 |
| ·结果与分析 | 第82-90页 |
| ·构建p53~(S/S)和p53~(S/+)MEF细胞系 | 第82页 |
| ·p53~(S/+)MEF细胞对H—Ras~(G12V)高表达有应激 | 第82-83页 |
| ·p53~(S/+)细胞中野生型的等位基因仍具有诱导细胞衰老的功能 | 第83-85页 |
| ·p53S在持续的癌基因表达的压力下出现杂合子丢失 | 第85-86页 |
| ·p53S在H Ras~(G12V)表达的背景下出现杂合子丢失的分子机制 | 第86-89页 |
| ·H-Ras~(G12V)使得p53~(S/+)细胞对DNA合成抑制剂阿霉素的处理不敏感 | 第89-90页 |
| ·讨论 | 第90-94页 |
| 第五章 总结与展望 | 第94-98页 |
| 致谢 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-116页 |
| 附录A 攻读博士期间主要研究成果 | 第116-117页 |
