| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 英文缩略词 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-20页 |
| 一、海洋来源抗肿瘤活性物质研究概况 | 第10-16页 |
| 二、海洋来源的蛋白类抗肿瘤活性物质 | 第16-18页 |
| 三、传统海洋中药-文蛤抗肿瘤物质的研究 | 第18-19页 |
| 四、本研究的目的和意义 | 第19-20页 |
| 第二章 文蛤抗肿瘤蛋白MML 的分离纯化 | 第20-39页 |
| 一、实验材料、试剂和仪器 | 第20-23页 |
| 1、实验材料 | 第20-21页 |
| 2、实验用肿瘤细胞株 | 第21页 |
| 3、实验试剂 | 第21-22页 |
| 4、实验用仪器 | 第22-23页 |
| 二、实验方法 | 第23-31页 |
| 1、文蛤体液的采集 | 第23页 |
| 2、MML 的分离纯化 | 第23-26页 |
| 3、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第26-28页 |
| 4、细胞培养相关溶液的配制 | 第28页 |
| 5、细胞的复苏与培养 | 第28-29页 |
| 6、肿瘤细胞增殖抑制实验（MTT 比色法） | 第29-30页 |
| 7、BCA 法蛋白浓度测定 | 第30-31页 |
| 三、实验结果 | 第31-35页 |
| 1、硫酸铵分级分离 | 第31-32页 |
| 2、DEAE-cellulose52 弱阴离子交换色谱分离 | 第32页 |
| 3、CM-cellulose52 弱阳离子交换色谱分离 | 第32-33页 |
| 4、Phenyl Sepharose 疏水层析 | 第33-34页 |
| 5、RESource15Q 强阴离子层析 | 第34页 |
| 6、SDS-PAGE 对MML 分子量的测定 | 第34-35页 |
| 7、分离过程中各活性洗脱峰的体外抑瘤活性检测 | 第35页 |
| 四、讨论 | 第35-39页 |
| 1、硫酸铵分级分离 | 第36页 |
| 2、弱离子交换层析 | 第36-37页 |
| 3、疏水层析 | 第37-38页 |
| 4、强离子交换层析 | 第38-39页 |
| 第三章 MML 抗肿瘤的作用方式研究 | 第39-56页 |
| 一、实验材料、试剂和仪器 | 第39-40页 |
| 1、实验材料及肿瘤细胞株 | 第39页 |
| 2、实验试剂 | 第39-40页 |
| 3、实验用仪器 | 第40页 |
| 二、实验方法 | 第40-46页 |
| 1、细胞培养 | 第40页 |
| 2、相差显微镜对肿瘤细胞形态的观察 | 第40页 |
| 3、扫描电镜对MML 作用后肿瘤细胞膜表面变化的检测 | 第40页 |
| 4、肿瘤细胞的Hoechst33342/ PI 双染色 | 第40-41页 |
| 5、乳酸脱氢酶LDH 漏出率的检测 | 第41-43页 |
| 6、流式细胞仪进行细胞周期检测 | 第43页 |
| 7、微管蛋白α-tubulin 的荧光染色 | 第43-45页 |
| 8、凋亡细胞DNA 片断化分析 | 第45-46页 |
| 三、实验结果 | 第46-54页 |
| 1、肿瘤细胞形态的变化——相差显微镜观察 | 第46-49页 |
| 2、肿瘤细胞膜表面变化——扫描电镜检测 | 第49-50页 |
| 3、肿瘤细胞的Hoechst33342/PI 检测 | 第50页 |
| 4、乳酸脱氢酶（LDH）漏出率测定 | 第50-51页 |
| 5、MML 对肿瘤细胞周期的影响 | 第51-52页 |
| 6、微管蛋白α-tubulin 的荧光染色 | 第52-53页 |
| 7、MML 处理细胞DNA 片断化的分析 | 第53-54页 |
| 四、讨论 | 第54-56页 |
| 1、MML 对肿瘤细胞BEL-7402 的细胞膜毒性 | 第54-55页 |
| 2、MML 对BEL-7402 细胞周期的阻滞 | 第55页 |
| 3、MML 对肿瘤细胞BEL-7402 的凋亡诱导 | 第55-56页 |
| 第四章 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 硕士期间发表和完成的论文及专利 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
