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不同启动子在昆虫杆状病毒表达系统中的活性研究

摘要第1-4页
Abstract第4-8页
1 引言第8-19页
   ·杆状病毒简介第8页
   ·杆状病毒表达载体系统的特点第8-9页
   ·Bac-to-Bac 表达系统第9-10页
   ·昆虫杆状病毒表达载体系统的研究及应用第10-15页
     ·在基础研究领域中的应用第11页
     ·在医药、检疫领域中的应用第11页
     ·昆虫杆状病毒载体重组亚单位疫苗第11-12页
     ·非复制性病毒载体疫苗第12页
     ·基因治疗载体方面第12-13页
     ·用于体外测定新药和抗病毒复合物的效果第13页
     ·稳定细胞系的构建及基因的长效表达第13-14页
     ·重组杆状病毒作为哺乳动物细胞基因递送载体第14-15页
   ·杆状病毒基因启动子第15-19页
     ·启动子的概念第15页
     ·杆状病毒表达系统所用启动子的类型第15-16页
     ·病毒启动子调控机制第16-17页
     ·启动子和增强子作用机制第17页
     ·启动子的研究意义第17-19页
2 材料与方法第19-25页
   ·主要仪器和试剂第19页
   ·菌株、质粒和细胞第19页
   ·不同启动子第19页
   ·重组转移载体的构建及鉴定第19-22页
     ·目的片段的获得第19-20页
     ·目的片段与载体的连接第20-21页
     ·连接产物的转化第21页
     ·重组质粒DNA 的小量制备第21-22页
     ·重组质粒的限制性内切酶分析第22页
   ·重组杆粒的获得及鉴定第22-23页
     ·重组杆粒的获得第22页
     ·重组杆粒的PCR 鉴定第22-23页
   ·重组杆状病毒的获得与鉴定第23-25页
     ·细胞准备第23页
     ·昆虫细胞的转染第23-24页
     ·重组杆状病毒DNA 的提取及鉴定第24页
     ·重组杆状病毒的毒力扩增与保存第24页
     ·重组杆状病毒的滴度测定(空斑分析法)第24-25页
   ·利用流式细胞仪检测报告基因EGFP 的表达第25页
3 结果第25-36页
   ·目的片段的获得第25页
   ·重组转移载体的获得及酶切鉴定第25-28页
   ·重组杆粒的PCR 鉴定结果第28-29页
   ·重组杆状病毒的PCR 鉴定第29页
   ·含有不同启动子的重组杆状病毒在Sf9 细胞中的活性第29-30页
   ·不同启动子在昆虫细胞中的活性第30-33页
   ·不同感染复数与表达效率的关系第33-34页
   ·hr1对ETL启动子的增强作用第34-36页
4 讨论第36-39页
   ·重组杆状病毒在基因治疗及非复制性病毒载体疫苗研制中的前景第36页
   ·杆状病毒的复制及表达调控第36-37页
   ·不同启动子在昆虫杆状病毒表达系统中的活性比较第37页
   ·病毒感染复数(MOI)对外源基因表达效率的影响第37页
   ·杆状病毒同源重复区(hr1)序列对外源基因表达效率的影响第37-39页
5 结论第39-41页
参考文献第41-49页
附录第49-54页
作者简历第54页

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