| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 主要缩略语列表 | 第10-12页 |
| 文献综述 | 第12-20页 |
| 1 引言 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-35页 |
| ·材料 | 第21-23页 |
| ·菌株、细胞株和质粒 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21-22页 |
| ·所用引物序列 | 第22页 |
| ·主要仪器与设备 | 第22-23页 |
| ·方法 | 第23-35页 |
| ·PCR 扩增目的基因 | 第23-24页 |
| ·PCR 产物的回收及纯化 | 第24页 |
| ·目的基因(M1)PCR 产物和载体双酶切 | 第24页 |
| ·M1 基因片段和PTIG/Trx-E-Tag 双酶切产物的纯化 | 第24-25页 |
| ·M1 基因片段与载体PTIG/Trx-E-Tag 的连接 | 第25页 |
| ·确定克隆化基因在大肠杆菌中的表达 | 第25页 |
| ·表达蛋白的纯化 | 第25-26页 |
| ·纯化的M1 蛋白脱盐浓缩 | 第26页 |
| ·细胞培养与裂解 | 第26-27页 |
| ·BIAcore 检测蛋白间相互作用 | 第27页 |
| ·酵母双杂交试验流程图 | 第27-28页 |
| ·诱饵载体pGBKT7-H5M1 的构建 | 第28页 |
| ·酵母感受态制备与质粒转化 | 第28-29页 |
| ·pGBKT7-H5M1 诱饵载体自激活活性和毒性实验 | 第29页 |
| ·Westernblot 检测诱饵质粒在酵母中的表达 | 第29-30页 |
| ·融合方式筛选与分离肺 cDNA 文库 | 第30-31页 |
| ·PCR 鉴定筛选出的克隆 | 第31页 |
| ·酵母双杂交再次验证疑似阳性克隆 | 第31页 |
| ·构建全长 cDNA 序列并验证相互作用 | 第31-32页 |
| ·免疫沉淀（IP）验证M1 与RAS 蛋白相互作用 | 第32-33页 |
| ·细胞共定位实验 | 第33页 |
| ·BiFC 验证 M1 蛋白与 RAS 蛋白相互作用 | 第33-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-47页 |
| ·蛋白的表达、纯化与鉴定 | 第35-37页 |
| ·M1 蛋白原核表达载体的构建 | 第35页 |
| ·M1 蛋白的可溶性表达 | 第35-36页 |
| ·M1 蛋白的纯化与Westernblot 鉴定 | 第36-37页 |
| ·SPR/BIA 技术捕获细胞总蛋白 | 第37-39页 |
| ·BIAcore 检测基质蛋白M1 与BHK-21 细胞的相互作用蛋白 | 第37-39页 |
| ·质谱测定洗脱回收蛋白 | 第39页 |
| ·酵母双杂交筛选结果 | 第39-42页 |
| ·pGBKT7-H5M1 酵母双杂交诱饵载体的构建 | 第39-40页 |
| ·pGBKT7-H5M1 诱饵载体自激活活性和毒性分析 | 第40页 |
| ·WesternBlot检测诱饵蛋白在酵母中表达 | 第40-41页 |
| ·PCR 鉴定疑似阳性克隆 | 第41-42页 |
| ·从酵母中分离阳性质粒并再次验证相互作用 | 第42页 |
| ·M1 蛋白与RAS 蛋白相互作用验证结果 | 第42-47页 |
| ·相互验证重组质粒的构建 | 第42-43页 |
| ·酵母双杂交验证相互作用 | 第43页 |
| ·免疫沉淀分析M1 与RAS 蛋白相互作用 | 第43-44页 |
| ·共聚焦分析M1 蛋白和RAS 相互作用 | 第44-45页 |
| ·BiFC 验证M1 蛋白和RAS 相互作用 | 第45-47页 |
| 4 讨论 | 第47-51页 |
| ·M1 蛋白原核表达纯化及BIAcore 筛选结果分析 | 第47-48页 |
| ·酵母双杂交筛选结果分析 | 第48页 |
| ·RAS 蛋白和M1 蛋白相互作用验证分析 | 第48-51页 |
| 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-57页 |
| 附录 | 第57-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 作者简介 | 第62页 |
| 在读期间发表论文 | 第62页 |
