| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-14页 |
| 第1章 绪论 | 第14-22页 |
| ·研究背景及意义 | 第14-16页 |
| ·布氏杆菌病概述 | 第14页 |
| ·布氏杆菌介绍 | 第14页 |
| ·布氏杆菌分类及检测方法 | 第14-15页 |
| ·布氏杆菌感染机制 | 第15-16页 |
| ·布氏杆菌现有疫苗研究现状 | 第16-20页 |
| ·传统疫苗介绍 | 第16页 |
| ·布氏杆菌病疫苗应用现状 | 第16-18页 |
| ·布氏杆菌基因工程疫苗的研究 | 第18-19页 |
| ·重组亚单位疫苗研制 | 第19-20页 |
| ·毒力相关基因 | 第20页 |
| ·研究意义 | 第20-21页 |
| ·本文研究内容 | 第21-22页 |
| 第2章 L7/L12 基因的表达与鉴定 | 第22-30页 |
| ·材料和方法 | 第22-27页 |
| ·仪器、试剂、血清和试验动物 | 第22页 |
| ·引物设计 | 第22-23页 |
| ·L7/L12 基因PCR 模板的制备 | 第23页 |
| ·L7/L12 PCR 扩增 | 第23页 |
| ·PCR 产物纯化后克隆至pGEM-T Easy 载体 | 第23页 |
| ·质粒酶切鉴定 | 第23-24页 |
| ·质粒pGT-L7/L12 双酶切处理 | 第24页 |
| ·目的片段L7/L12 克隆至载体pSTV29 | 第24页 |
| ·L7/L12 的表达 | 第24-25页 |
| ·表达产物的鉴定 | 第25-27页 |
| ·结果 | 第27-29页 |
| ·L7/L12 PCR 结果 | 第27页 |
| ·L7/L12 TA 克隆的酶切鉴定 | 第27-28页 |
| ·L7/L12 与pSTV29 重组的鉴定 | 第28页 |
| ·L7/L12 表达产物的 SDS-PAGE 与WesternBlot 鉴定 | 第28-29页 |
| ·讨论 | 第29-30页 |
| 第3章 L7/L12-OMP31 融合蛋白的表达与鉴定 | 第30-54页 |
| ·材料和方法 | 第30-40页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第30页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第30-31页 |
| ·引物 | 第31页 |
| ·L7/L12、Omp31 基因扩增 | 第31-32页 |
| ·L7/L12、 Omp31 基因PCR 产物的纯化 | 第32页 |
| ·L7/L12、Omp31 基因PCR 产物的TA 克隆及鉴定 | 第32-35页 |
| ·L7/L12、 Omp31P 和Omp31D 基因目的片段的回收 | 第35-36页 |
| ·L7/L12/L12、Omp31P 和Omp31D 基因重组 | 第36页 |
| ·L7/L12、Omp31P 和 Omp31D 基因重组 PCR 产物 LOmp 的酶切鉴定 | 第36页 |
| ·重组产物Lomp 克隆至pGEM-T Easy Vector | 第36-37页 |
| ·重组LOmp 片段的回收 | 第37页 |
| ·中间载体的构建 | 第37-38页 |
| ·表达载体的构建 | 第38-39页 |
| ·融合蛋白的表达与鉴定 | 第39页 |
| ·融合蛋白中L7/L12、Omp31 抗原成分的鉴定 | 第39-40页 |
| ·结果 | 第40-51页 |
| ·L7/L12 OMP31 PCR 结果 | 第40-41页 |
| ·质粒pGT-L7/L12 HindⅢ和NgomⅣ双酶切结果 | 第41页 |
| ·质粒pGT-OMP31P NgomⅣ和KasⅠ双酶切结果 | 第41-42页 |
| ·质粒pGT-OMP31D KasⅠ和HindⅢ双酶切结果 | 第42页 |
| ·pGT-L7/L12、pGT-OMP31P 和pGT-OMP31D PCR 结果 | 第42-43页 |
| ·L7/L12、OMP31P 和 OMP31D 双酶切目的片段的回收 | 第43页 |
| ·重组基因LOMP PCR 鉴定结果 | 第43-44页 |
| ·重组PCR 产物LOmp 的酶切鉴定 | 第44页 |
| ·重组产物LOmp TA 克隆酶切鉴定 | 第44-45页 |
| ·重组LOmp 片段的回收 | 第45页 |
| ·中间载体pPL-SD 酶切结果 | 第45-46页 |
| ·重组质粒酶切鉴定 | 第46-47页 |
| ·重组质粒pPL-SDLOmp 经EcoRⅠ酶切鉴定方向 | 第47页 |
| ·重组产物表达蛋白结构预测及分析 | 第47-48页 |
| ·质粒pPL-SDLOmp BamHⅠ酶切处理 | 第48-49页 |
| ·载体pME290 BamHⅠ酶切处理 | 第49页 |
| ·重组质粒pME290-SDLOmp BamHⅠ酶切鉴定 | 第49-50页 |
| ·重组 PPL-SDLOmp 表达产物 SDS-PAGE 电泳与 Westernblot 分析 | 第50页 |
| ·融合蛋白中L7/L12、Omp31 抗原成分的鉴定 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-54页 |
| 第4章 L7/L12-Omp31 融合蛋白免疫原性研究 | 第54-56页 |
| ·材料和方法 | 第54页 |
| ·主要试剂 | 第54页 |
| ·免疫原的制备 | 第54页 |
| ·动物免疫 | 第54页 |
| ·免疫血清效价测定 | 第54页 |
| ·结果 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 附录 | 第62-65页 |
| 攻读硕士学位期间所发表的学术论文 | 第65-66页 |
| 详细摘要 | 第66-69页 |
