| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-26页 |
| 缩略词 | 第26-28页 |
| 第一章 胞外核苷酸对人内皮细胞增殖的影响及其机制研究 | 第28-64页 |
| 第一节 胞外核苷酸对人内皮细胞增殖、凋亡及自噬的影响 | 第28-44页 |
| 1 前言 | 第28-29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-36页 |
| ·材料 | 第29-31页 |
| ·细胞培养与传代 | 第31-32页 |
| ·CCK-8细胞增殖试验 | 第32页 |
| ·PI-Annexin Ⅴ凋亡试剂盒检测细胞凋亡 | 第32页 |
| ·PI单染法检测细胞周期 | 第32-33页 |
| ·GFP-LC3质粒转染HUVEC-Cs | 第33页 |
| ·荧光显微镜观察细胞内自噬体 | 第33页 |
| ·蛋白质抽提 | 第33页 |
| ·SDS-PAGE | 第33-34页 |
| ·Western blot(蛋白免疫印记) | 第34-35页 |
| ·转膜 | 第34页 |
| ·封闭(Blocking) | 第34页 |
| ·一抗孵育(Primary antibody incubation) | 第34-35页 |
| ·二抗孵育(Secondary antibody inucubation) | 第35页 |
| ·蛋白质检测(Detection of proteins) | 第35页 |
| ·统计分析 | 第35-36页 |
| 3 结果 | 第36-37页 |
| ·ATP/ADP对HUVEC-Cs和pHAEC增殖的抑制作用 | 第36页 |
| ·ATP/ADP对HUVEC-Cs细胞凋亡的影响 | 第36页 |
| ·ATP/ADP对HUVEC-Cs细胞周期的影响 | 第36页 |
| ·ATP/ADP诱导HUVEC-Cs细胞自噬 | 第36-37页 |
| 4 附图 | 第37-41页 |
| 5 讨论 | 第41-43页 |
| 6 结论 | 第43-44页 |
| 第二节 ATP抑制人内皮细胞增殖的机制研究 | 第44-64页 |
| 1 前言 | 第44-45页 |
| 2 材料与方法 | 第45-53页 |
| ·材料 | 第45-48页 |
| ·细胞培养与传代 | 第48页 |
| ·CCK-8细胞增殖试验 | 第48-49页 |
| ·PI单染法检测细胞周期 | 第49页 |
| ·PI-Annexin Ⅴ凋亡试剂盒检测细胞凋亡 | 第49页 |
| ·总RNA抽提 | 第49-50页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第50页 |
| ·蛋白质抽提 | 第50页 |
| ·SDS-PAGE | 第50-51页 |
| ·Western blot(蛋白免疫印记) | 第51-52页 |
| ·转膜 | 第51页 |
| ·封闭(Blocking) | 第51页 |
| ·一抗孵育(Primary antibody incubation) | 第51-52页 |
| ·二抗孵育(Secondary antibody inucubation) | 第52页 |
| ·蛋白质检测(Detection of proteins) | 第52页 |
| ·P2Y_2及P2Y_(11) shRNA质粒转染HUVEC-Cs | 第52-53页 |
| ·统计分析 | 第53页 |
| 3 结果 | 第53-55页 |
| ·P2受体介导ATP对HUVEC-Cs增殖的抑制作用及P2受体在人内皮细胞的表达情况 | 第53页 |
| ·ATP通过P2Y_(11)受体将细胞周期阻滞于S期从而抑制HUVEC-Cs增殖 | 第53-54页 |
| ·ATP抑制HUVEC-Cs增殖不涉及ERK信号通路 | 第54页 |
| ·ATP增强顺铂诱导的细胞死亡效应 | 第54页 |
| ·ATP通过P2Y_(11)受体下调Bcl-2表达从而增强顺铂诱导的细胞凋亡效应 | 第54-55页 |
| 4 附图 | 第55-61页 |
| 5 讨论 | 第61-63页 |
| 6 结论 | 第63-64页 |
| 第二章 胞外核苷酸对人脐血内皮祖细胞生物学功能的影响及其机制研究 | 第64-96页 |
| 第一节 胞外核苷酸对人脐血内皮祖细胞增殖的影响 | 第64-78页 |
| 1 前言 | 第64-65页 |
| 2 材料与方法 | 第65-71页 |
| ·材料 | 第65-67页 |
| ·内皮祖细胞的分离培养与传代 | 第67-68页 |
| ·细胞形态的观察 | 第68页 |
| ·内皮祖细胞的鉴定 | 第68-69页 |
| ·内皮祖细胞摄取DiI-ac-LDL及其结合UEA-1能力 | 第68-69页 |
| ·RT-PCR检测内皮祖细胞膜表面标志物 | 第69页 |
| ·CCK-8细胞增殖试验 | 第69页 |
| ·总RNA抽提 | 第69-70页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第70-71页 |
| ·逆转录反应(RT) | 第70页 |
| ·PCR扩增 | 第70-71页 |
| ·统计分析 | 第71页 |
| 3 结果 | 第71-72页 |
| ·内皮祖细胞的形态学及功能鉴定 | 第71页 |
| ·P2受体在EPCs中的表达情况 | 第71页 |
| ·胞外核苷酸对EPCs增殖的影响 | 第71-72页 |
| 4 附图 | 第72-75页 |
| 5 讨论 | 第75-77页 |
| 6 结论 | 第77-78页 |
| 第二节 胞外核苷酸对LPS诱导人脐血内皮祖细胞细胞因子表达的影响及可能机制 | 第78-96页 |
| 1 前言 | 第78-79页 |
| 2 材料与方法 | 第79-86页 |
| ·材料 | 第79-82页 |
| ·内皮祖细胞的分离培养与传代 | 第82页 |
| ·细胞形态的观察 | 第82页 |
| ·总RNA抽提 | 第82-83页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第83-84页 |
| ·逆转录反应(RT) | 第83页 |
| ·PCR扩增 | 第83-84页 |
| ·蛋白质抽提 | 第84页 |
| ·SDS-PAGE | 第84-85页 |
| ·Western blot(蛋白免疫印记) | 第85-86页 |
| ·转膜 | 第85页 |
| ·封闭(Blocking) | 第85页 |
| ·一抗孵育(Primary antibody incubation) | 第85页 |
| ·二抗孵育(Secondary antibody inucubation) | 第85-86页 |
| ·蛋白质检测(Detection of protein) | 第86页 |
| ·统计分析 | 第86页 |
| 3 结果 | 第86-88页 |
| ·TLRs在EPCs中的表达情况及EPCs表达功能性的TLR4 | 第86页 |
| ·不同浓度的ATP/UTP对TLR4 mRNA表达的影响 | 第86-87页 |
| ·低浓度的ATP/UTP对LPS诱导EPCs表达细胞因子的影响 | 第87页 |
| ·低浓度的ATP/UTP对LPS活化TLR4信号通路的影响 | 第87-88页 |
| 4 附图 | 第88-93页 |
| 5 讨论 | 第93-95页 |
| 6 结论 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-109页 |
| 综述 | 第109-124页 |
| 参考文献 | 第119-124页 |
| 致谢 | 第124-125页 |
| 附录 | 第125-126页 |
