灵芝真菌免疫调节蛋白基因在虫草真菌中的表达与特性分析
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 英文缩写词表 | 第9-10页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 第一部分 文献综述 | 第11-20页 |
| 1 冬虫夏草 | 第11-13页 |
| ·虫草的形态特征 | 第11页 |
| ·虫草的研究现状 | 第11-12页 |
| ·虫草的应用前景 | 第12-13页 |
| 2 启动子的选择及辅助元件的应用 | 第13-15页 |
| ·启动子的选择 | 第13页 |
| ·辅助元件的应用 | 第13-15页 |
| 3 真菌免疫调节蛋白的研究现状 | 第15-20页 |
| ·免疫调节蛋白的发现及其特征 | 第15-19页 |
| ·免疫调节蛋白的前景及展望 | 第19-20页 |
| 第二部分 研究内容 | 第20-47页 |
| 实验一 冬虫夏草菌丝的分离及培养 | 第20-31页 |
| 1 实验材料 | 第20-21页 |
| ·真菌材料 | 第20页 |
| ·培养基 | 第20页 |
| ·分子生物学与生物化学试剂 | 第20页 |
| ·主要仪器设备 | 第20-21页 |
| ·引物 | 第21页 |
| 2 实验方法 | 第21-24页 |
| ·虫草真菌的分离及纯化 | 第21页 |
| ·虫草真菌菌丝染色 | 第21页 |
| ·虫草真菌基因组DNA的提取 | 第21-22页 |
| ·虫草真菌的18S rDNA的扩增 | 第22页 |
| ·DNA片段的回收连接与测序 | 第22-23页 |
| ·虫草真菌培养基条件的优化 | 第23-24页 |
| 3 实验结果 | 第24-29页 |
| ·虫草真菌的分离及纯化 | 第24页 |
| ·虫草真菌的染色分析 | 第24-25页 |
| ·虫草真菌基因组18S rDNA的扩增 | 第25页 |
| ·虫草真菌测序结果分析 | 第25-28页 |
| ·虫草培养基条件的优化 | 第28-29页 |
| 4 讨论 | 第29-30页 |
| 5 小结 | 第30-31页 |
| 实验二 灵芝真菌免疫调节蛋白基因在虫草中的表达 | 第31-47页 |
| 1 实验材料 | 第31-32页 |
| ·真菌材料 | 第31页 |
| ·菌种和质粒 | 第31页 |
| ·培养基 | 第31页 |
| ·分子生物学与生物化学试剂 | 第31页 |
| ·引物 | 第31-32页 |
| 2 实验方法 | 第32-38页 |
| ·灵芝总RNA的提取 | 第32页 |
| ·真菌免疫调节蛋白基因的克隆 | 第32-33页 |
| ·PCR得到的fip基因的回收连接与测序 | 第33页 |
| ·对克隆到的fip基因进行修饰 | 第33页 |
| ·PCR得到的fipk基因的回收连接与测序 | 第33页 |
| ·p3300bfipk载体的构建 | 第33-35页 |
| ·表达载体正确性的鉴定 | 第35页 |
| ·表达载体转化农杆菌 | 第35-36页 |
| ·根癌农杆菌介导法转化虫草菌丝 | 第36页 |
| ·转基因虫草真菌的鉴定 | 第36-38页 |
| 3 实验结果 | 第38-45页 |
| ·灵芝中fip基因的克隆 | 第38页 |
| ·fip基因的修饰 | 第38-39页 |
| ·p3300bfipk载体的构建 | 第39-41页 |
| ·表达载体正确性的鉴定 | 第41-42页 |
| ·根癌农杆菌介导法转化虫草菌丝 | 第42-43页 |
| ·转基因虫草真菌的鉴定 | 第43-45页 |
| 4 讨论 | 第45-46页 |
| 5 小结 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 作者简介 | 第53-54页 |
| 导师评阅表 | 第54页 |
