| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 目录 | 第10-13页 |
| 图表索引 | 第13-14页 |
| 中英文缩略词 | 第14-16页 |
| 引言 | 第16-22页 |
| 材料与方法 | 第22-46页 |
| 1 实验材料和仪器设备 | 第22-29页 |
| ·标本采集 | 第22页 |
| ·菌株与载体 | 第22-23页 |
| ·主要试剂 | 第23-24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24页 |
| ·主要溶液配制 | 第24-27页 |
| ·引物和连接肽Linker的设计 | 第27-29页 |
| 2 实验方法 | 第29-46页 |
| ·技术路线 | 第29-30页 |
| ·淋巴细胞总RNA的抽提 | 第30-32页 |
| ·逆转录(RT-PCR)扩增cDNA | 第32-34页 |
| ·重链和轻链PCR产物DNA片段凝胶回收 | 第34-35页 |
| ·Linker连接肽的合成和酶促磷酸化粘端 | 第35页 |
| ·V_H+Linker+V_L的制备 | 第35-37页 |
| ·制备载体质粒DNA | 第37-39页 |
| ·单链抗体基因库(ScFv)与噬菌粒载体pCANTAB-5E拼接 | 第39-41页 |
| ·制备感受态大肠杆菌TG1 | 第41页 |
| ·辅助噬菌体的制备 | 第41-42页 |
| ·噬菌体的滴定 | 第42-43页 |
| ·转化感受态大肠杆菌TG1和构建ScFv单链噬菌体抗体库 | 第43页 |
| ·重组质粒的特异PCR鉴定 | 第43-44页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定和保存 | 第44页 |
| ·阳性克隆基因序列测定 | 第44页 |
| ·序列的比较分析 | 第44-46页 |
| 结果与分析 | 第46-52页 |
| 1 原发性胃癌患者癌周转移淋巴结总RNA的提取 | 第46页 |
| 2 RT-PCR扩增抗体轻链、重链基因片段 | 第46页 |
| 3 V_H和V_L基因片段的扩增 | 第46-47页 |
| 4 ScFv基因的组装与扩增 | 第47页 |
| 5 ScFv噬菌体单链抗体库的构建 | 第47-48页 |
| 6 阳性克隆质粒PCR扩增鉴定 | 第48-49页 |
| 7 阳性重组质粒的双酶切鉴定 | 第49-50页 |
| 8 酶切阳性质粒测序结果 | 第50-52页 |
| 讨论 | 第52-62页 |
| 1 单链抗体及其多样性 | 第52-54页 |
| 2 噬菌体抗体库库容量的增加 | 第54-59页 |
| 3 噬菌体展示抗体库技术 | 第59-62页 |
| 结论 | 第62-64页 |
| 参考文献(Reference) | 第64-68页 |
| 综述 单链抗体在肿瘤诊治中的应用及研究进展 | 第68-82页 |
| 1 基因工程抗体 | 第69-72页 |
| 2 噬菌体抗体库技术 | 第72-75页 |
| 3 单链抗体的研究进展和在临床诊治中的应用 | 第75-77页 |
| 4 单链抗体(ScFv)与肿瘤诊治 | 第77-78页 |
| 5 单链抗体与胃癌的免疫基因治疗 | 第78-81页 |
| 6 应用及其展望 | 第81-82页 |
| 参考文献(Reference) | 第82-86页 |
| 附录 载体pCANTAB-5E | 第86-88页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文 | 第88-90页 |
| 致谢 | 第90页 |