| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 略语说明 | 第12-13页 |
| 前言 | 第13-14页 |
| 第一部分 | 第14-24页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-24页 |
| 1. 氨基甲酸酯类杀虫剂的发展进程 | 第14-15页 |
| 2. 呋喃丹简介 | 第15-17页 |
| 2.1 呋喃丹的理化性质 | 第15-16页 |
| 2.2 呋喃丹对环境的危害 | 第16-17页 |
| 3 微生物降解呋喃丹的研究进展 | 第17-22页 |
| 3.1 降解呋喃丹的微生物 | 第17-18页 |
| 3.2 呋喃丹微生物降解途径的研究 | 第18-20页 |
| 3.3 呋喃丹微生物降解相关酶的研究 | 第20-21页 |
| 3.4 呋喃丹微生物降解相关基因的研究 | 第21页 |
| 3.5 呋喃丹污染环境的微生物修复研究 | 第21-22页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第22-24页 |
| 第二部分 实验部分 | 第24-78页 |
| 第二章 Sphingomonas sp. CDS-1中呋喃丹降解基因的克隆与功能验证 | 第24-48页 |
| 第一节 Sphingomonas sp. CDS-1基因组测序分析 | 第24-32页 |
| 1 材料与方法 | 第24-26页 |
| 2 结果分析 | 第26-32页 |
| 2.1 菌株CDS-1对呋喃丹降解功能的验证 | 第26-27页 |
| 2.2 菌株CDS-1基因组DNA的提取 | 第27页 |
| 2.3 基因组测序及其分析情况 | 第27-30页 |
| 2.4 酯酶基因cehA的比对分析 | 第30页 |
| 2.5 单加氧基因的寻找 | 第30-31页 |
| 2.6 还原酶基因的寻找 | 第31-32页 |
| 第二节 cehA的突变和功能验证 | 第32-46页 |
| 1 材料与方法 | 第33-41页 |
| 2 结果分析 | 第41-46页 |
| 本章小节 | 第46-48页 |
| 第三章 呋喃酚单加氧酶基因和还原酶基因的克隆与功能验证 | 第48-66页 |
| 1 材料与方法 | 第48-54页 |
| 1.1 培养基与试剂 | 第48页 |
| 1.2 供试菌株和质粒 | 第48-49页 |
| 1.3 单加氧酶基因cfdC的敲除 | 第49-50页 |
| 1.4 单加氧酶基因cfdC的回补 | 第50-51页 |
| 1.5 cfdC基因的异源表达 | 第51-53页 |
| 1.6 可能还原酶基因的异源表达 | 第53-54页 |
| 2 结果分析 | 第54-64页 |
| 2.1 单加氧酶基因cfdC的敲除 | 第54-56页 |
| 2.2 CDQC的降解特性 | 第56-57页 |
| 2.3 cfdC基因的回补 | 第57-59页 |
| 2.4 共表达载体的构建 | 第59-62页 |
| 2.5 可能还原酶基因的寻找 | 第62-64页 |
| 3 本章小节 | 第64-66页 |
| 第四章 呋喃酚单加氧酶与还原酶基因在大肠杆菌中的表达及其酶学特性的研究 | 第66-78页 |
| 1 材料与方法 | 第66-69页 |
| 1.1 培养基与试剂 | 第66页 |
| 1.2 供试菌株和质粒 | 第66页 |
| 1.3 呋喃酚单加氧酶基因cfdC的异源表达 | 第66-67页 |
| 1.4 呋喃酚单加氧酶CfdC的纯化 | 第67页 |
| 1.5 还原酶基因的异源表达 | 第67页 |
| 1.6 还原酶OrfX的纯化 | 第67-68页 |
| 1.7 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第68页 |
| 1.8 酶活性检测的反应体系及其功能验证 | 第68页 |
| 1.9 呋喃酚单加氧酶CdC与还原酶OrfX降解呋喃酚最佳比例的测定 | 第68页 |
| 1.10 呋喃酚单加氧酶CfdC对呋喃酚动力学参数的测定 | 第68页 |
| 1.11 还原酶OrfX对辅因子动力学参数的测定 | 第68-69页 |
| 2 结果分析 | 第69-76页 |
| 2.1 呋喃酚单加氧酶基因cfdC的表达与蛋白纯化 | 第69-70页 |
| 2.2 还原酶基因orfX的表达与蛋白纯化 | 第70-71页 |
| 2.3 纯酶功能的验证及对呋喃酚降解产物的鉴定 | 第71-74页 |
| 2.4 酶动力学参数的测定 | 第74-76页 |
| 3 本章小节 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-86页 |
| 全文总结 | 第86-88页 |
| 论文主要创新点 | 第88-90页 |
| 附录 | 第90-96页 |
| 附录一 文中所用培养基及试剂配方 | 第90-93页 |
| 附录二 相关基因序列 | 第93-96页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第96-98页 |
| 致谢 | 第98页 |
