| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11页 |
| 前言 | 第13-22页 |
| 1 化脓隐秘杆菌研究进展 | 第13-14页 |
| 2 神经氨酸酶研究进展 | 第14页 |
| 3 细菌抗菌药物耐药对毒力的影响 | 第14-21页 |
| 3.1 细菌对β-内酰胺类药物产生耐药对毒力的影响 | 第15-17页 |
| 3.2 细菌对氟喹诺酮类药物产生耐药对毒力的影响 | 第17-18页 |
| 3.3 细菌对四环素类药物产生耐药对毒力的影响 | 第18-19页 |
| 3.4 细菌对大环内酯类药物产生耐药对毒力的影响 | 第19-20页 |
| 3.5 细菌对杆菌肽类药物产生耐药对毒力的影响 | 第20页 |
| 3.6 细菌对氨基糖苷类药物产生耐药对毒力的影响 | 第20-21页 |
| 4 本研究的目的与意义 | 第21-22页 |
| 试验一 化脓隐秘杆菌NanP的生物学信息分析 | 第22-29页 |
| 1.1 材料 | 第22页 |
| 1.1.1 生物信息学数据库 | 第22页 |
| 1.1.2 分析工具 | 第22页 |
| 1.1.3 生物信息学分析软件 | 第22页 |
| 1.2 方法 | 第22-23页 |
| 1.2.1 化脓隐秘杆菌NanP的生物信息学分析 | 第22-23页 |
| 1.3 结果与分析 | 第23-27页 |
| 1.3.1 基本理化性质的分析结果 | 第23页 |
| 1.3.2 序列特异性分析结果 | 第23页 |
| 1.3.3 结构域分析结果 | 第23-24页 |
| 1.3.4 磷酸化位点预测结果 | 第24-25页 |
| 1.3.5 信号肽的预测结果 | 第25页 |
| 1.3.6 跨膜结构的预测结果 | 第25页 |
| 1.3.7 NanP的亲疏水性、可塑性、可及性及抗原表位预测结果 | 第25-27页 |
| 1.4 讨论 | 第27-28页 |
| 1.5 小结 | 第28-29页 |
| 试验二 化脓隐秘杆菌NanP表达量与β-内酰胺类药物耐药相关性研究 | 第29-58页 |
| 2.1 材料 | 第29-35页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第29-30页 |
| 2.1.2 载体与菌种 | 第30页 |
| 2.1.3 主要试剂和抗体 | 第30-31页 |
| 2.1.4 主要溶液及培养基的配制 | 第31-34页 |
| 2.1.5 主要仪器和设备 | 第34-35页 |
| 2.1.6 耗材 | 第35页 |
| 2.2 方法 | 第35-46页 |
| 2.2.1 化脓隐秘杆菌nanP基因的扩增 | 第35-37页 |
| 2.2.2 nanP基因的重组表达载体的构建及表达 | 第37-41页 |
| 2.2.3 His-NanP蛋白的纯化 | 第41-43页 |
| 2.2.4 His-NanP重组蛋白的Western-blot鉴定 | 第43页 |
| 2.2.5 纯化后His-NanP蛋白含量的测定 | 第43页 |
| 2.2.6 化脓隐秘杆菌NanP的多克隆抗体制备 | 第43-44页 |
| 2.2.7 兔抗His-NanP血清效价的测定 | 第44页 |
| 2.2.8 兔抗His-NanP多克隆抗体的反应性检测 | 第44页 |
| 2.2.9 化脓隐秘杆菌的培养 | 第44页 |
| 2.2.10 化脓隐秘杆菌总蛋白的提取 | 第44-45页 |
| 2.2.11 Western-blot检测化脓隐秘杆菌分离株NanP表达水平 | 第45-46页 |
| 2.3 结果与分析 | 第46-55页 |
| 2.3.1 化脓隐秘杆菌标准株ATCC19411总基因组DNA提取结果 | 第46页 |
| 2.3.2 化脓隐秘杆菌nanP基因的PCR扩增结果 | 第46-47页 |
| 2.3.3 重组表达质粒pEASY-BluntE1-nanP的构建和PCR鉴定结果 | 第47页 |
| 2.3.4 目的基因序列的测定和分析 | 第47页 |
| 2.3.5 NanP的原核表达与SDS-PAGE分析 | 第47-48页 |
| 2.3.6 His-NanP表达形式的分析结果 | 第48-49页 |
| 2.3.7 His-NanP可溶性表达条件优化及NanP蛋白纯化结果 | 第49-50页 |
| 2.3.8 His-NanP蛋白的鉴定结果 | 第50页 |
| 2.3.9 检测兔抗His-NanP蛋白的多克隆抗体的反应性 | 第50-51页 |
| 2.3.10 兔抗His-NanP多克隆抗体效价测定结果 | 第51页 |
| 2.3.11 化脓隐秘杆菌NanP蛋白表达量分析结果 | 第51-52页 |
| 2.3.12 β-内酰胺类抗生素耐药与化脓隐秘杆菌分离株NanP表达量的相关性分析 | 第52-55页 |
| 2.4 讨论 | 第55-57页 |
| 2.4.1 nanP基因原核表达 | 第55页 |
| 2.4.2 诱导表达条件的优化 | 第55-56页 |
| 2.4.3 兔抗化脓隐秘杆菌NanP多克隆抗体的制备及鉴定 | 第56页 |
| 2.4.4 化脓隐秘杆菌NanP表达量与β-内酰胺类抗生素耐药的相关性 | 第56-57页 |
| 2.5 小结 | 第57-58页 |
| 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 附录 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 攻读硕士学位期间发表的文章 | 第67-68页 |
