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乏氧/辐射双敏感启动子介导shTRAIL联合放射治疗肺癌的体外抑瘤效应研究

前言第1-10页
第1章 绪论第10-46页
   ·基因治疗的研究进展及应用前景第10-25页
     ·基因治疗的概念第10-11页
     ·基因治疗的策略和方法第11-12页
     ·基因治疗的关键点第12-22页
     ·基因治疗中的问题第22-23页
     ·基因治疗的发展及前景第23-25页
   ·肺癌的基因治疗第25-31页
     ·癌基因治疗第25-26页
     ·抑癌基因治疗第26页
     ·凋亡相关基因治疗第26-28页
     ·多药耐药基因治疗第28页
     ·自杀基因第28-29页
     ·免疫相关基因第29-30页
     ·HRE介导的肺癌基因治疗第30-31页
   ·肺癌的基因-放射治疗第31-36页
     ·肺癌基因放射治疗理论第31页
     ·肺癌基因放射治疗的分类第31-36页
   ·TRAIL与肺癌第36-43页
     ·TRAIL的结构特点及表达调控第36-37页
     ·TRAIL的受体第37-38页
     ·TRAIL诱导凋亡的机制第38-40页
     ·常细胞逃逸凋亡的机制第40页
     ·TRAIL在治疗肺癌中的应用第40-43页
   ·展望第43-46页
第2章 材料与方法第46-68页
   ·主要试剂及器材第46-48页
     ·主要试剂第46-48页
     ·主要器材第48页
   ·主要仪器第48-49页
   ·质粒和菌株第49页
   ·细胞生物学实验第49-54页
     ·细胞的培养第49-52页
     ·HRE及Egr1启动子活性测定第52页
     ·细胞生长曲线的测定第52-53页
     ·细胞增殖能力的测定第53页
     ·流式细胞术检测细胞周期及凋亡第53页
     ·TUNEL法检测细胞凋亡第53-54页
     ·细胞放射敏感性的测定第54页
   ·分子生物学实验第54-67页
     ·细菌的培养第54-56页
     ·重组质粒的制备第56-59页
     ·载体的构建及鉴定第59-61页
     ·shTRAIL、DR4及DR5 mRNA的表达第61-64页
     ·shTRAIL、DR4、DR5及capase-3的表达第64-67页
   ·统计学处理第67-68页
第3章 实验结果第68-90页
   ·重组质粒的构建及鉴定第68-73页
     ·重组质粒pcDNA3.1-CMV-EGFP构建及鉴定第68页
     ·pcDNA3.1-Egr1-EGFP的构建和鉴定第68-69页
     ·pcDNA3.1-HRE/Egr1-EGFP第69-70页
     ·pcDNA3.1-CMV-shTRAIL第70-71页
     ·pcDNA3.1-Egr1-shTRAIL第71-72页
     ·pcDNA3.1-HRE/Egr1-shTRAIL第72-73页
   ·转染效率的测定第73页
   ·Egr1启动子辐射活性第73-74页
   ·HRE对Egr1启动子辐射活性的影响第74-75页
   ·pcshT、pcEshT和pcHEshT质粒转染A549细胞后乏氧或/和辐射对细胞生长的影响第75-78页
     ·A549细胞的生长曲线第76-77页
     ·A549细胞增殖能力变化第77-78页
   ·流式细胞术检测pcshT、pcEshT和pcHEshT质粒转染A549细胞后乏氧或/和辐射对细胞周期和凋亡的影响第78-80页
   ·TUNEL检测pcshT、pcEshT和pcHEshT质粒转染A549细胞后乏氧或/和辐射对细胞凋亡的影响第80-81页
   ·pcshT、pcEshT和pcHEshT质粒转染A549细胞后常氧与乏氧对辐射敏感性的影响第81-83页
   ·pcshT、pcEshT和pcHEshT质粒转染A549细胞后乏氧或/和辐射对细胞中相关基因mRNA表达的影响第83-86页
   ·pcshT、pcEshT和pcHEshT质粒转染A549细胞后乏氧或/和辐射对细胞中相关基因蛋白表达的影响第86-90页
第4章 讨论第90-100页
   ·实验设计的可行性分析第91-93页
     ·实验方法的选择第91-92页
     ·辐射剂量的选择第92-93页
     ·氧浓度的选择第93页
   ·Egr1辐射诱导增强特性第93-94页
   ·缺氧对Egr1特性的影响第94-95页
   ·HRE/Egr1启动子的转录调控特性第95-96页
   ·HRE/Egr1双敏感启动子调控TRAIL联合放射对肺腺癌A549细胞的作用及机制第96-100页
结论第100-102页
参考文献第102-116页
附图第116-126页
攻博期间发表的学术论文及参加课题情况第126-128页
致谢第128-130页
中文摘要第130-136页
Abstract第136-142页

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