| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第7-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-25页 |
| 1.1 黄腐酚及其生物活性 | 第11-13页 |
| 1.1.1 黄腐酚 | 第11-12页 |
| 1.1.2 黄腐酚的生物活性 | 第12-13页 |
| 1.2 活性氧 | 第13-16页 |
| 1.2.1 ROS种类 | 第14页 |
| 1.2.2 ROS来源 | 第14-15页 |
| 1.2.3 ROS调控 | 第15-16页 |
| 1.3 NADPH氧化酶 | 第16-20页 |
| 1.3.1 NADPH氧化酶复合物的组成、组装和活化 | 第17-19页 |
| 1.3.2 NADPH氧化酶与活性氧 | 第19-20页 |
| 1.4 CRISPR cas基因编辑技术 | 第20-22页 |
| 1.4.1 CRISPR cas分类 | 第20-21页 |
| 1.4.2 Cas9：一个RNA介导的用于基因编辑的核酸酶 | 第21-22页 |
| 1.5 立论依据 | 第22-25页 |
| 1.5.1 不同位点产生的ROS机理、生理作用各有不同 | 第22-23页 |
| 1.5.2 本实验室前期研究 | 第23-25页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第25-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第25页 |
| 2.1.1 化合物 | 第25页 |
| 2.1.2 细胞系 | 第25页 |
| 2.2 主要实验试剂与仪器 | 第25-28页 |
| 2.2.1 实验试剂 | 第25-27页 |
| 2.2.2 实验所需的主要试剂盒 | 第27页 |
| 2.2.3 实验所需的主要仪器 | 第27-28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-35页 |
| 2.3.1 实验细胞复苏、冻存、培养 | 第28-30页 |
| 2.3.2 DCFH-DA荧光探针和流式细胞仪检测细胞内ROS | 第30页 |
| 2.3.3 siRNA | 第30页 |
| 2.3.4 激光共聚焦显微镜观察蛋白活化 | 第30-31页 |
| 2.3.5 CRISPR-Cas9技术 | 第31-32页 |
| 2.3.6 PCR | 第32-34页 |
| 2.3.7 数据分析 | 第34-35页 |
| 第三章 实验结果 | 第35-47页 |
| 3.1 黄腐酚诱导ROS产生 | 第35-36页 |
| 3.2 DPI对 黄腐酚诱导ROS产生具有抑制作用 | 第36-37页 |
| 3.3 黄腐酚激活NADPH氧化酶 | 第37-38页 |
| 3.4 siRNA技术构建NOX亚基gp91~(phox)基因表达下调细胞模型,结果支持黄腐酚促ROS生成活性降低 | 第38-39页 |
| 3.5 CRISPR-Cas9 技术构建敲除CYBB基因细胞模型,结果支持NADPH氧化酶是黄腐酚促氧化靶点 | 第39-43页 |
| 3.5.1 pSpCas9(BB)-2A-Puro(PX459)V2.0空载载体介绍及gRNA设计 | 第39-40页 |
| 3.5.2 嘌呤霉素筛选及PCR验证 | 第40-43页 |
| 3.5.3 检测敲除gp91~(phox)基因的模型细胞ROS生成能力 | 第43页 |
| 3.6 黄腐酚诱导人红细胞产生ROS,且会受到DPI抑制 | 第43-47页 |
| 第四章 讨论 | 第47-50页 |
| 4.1 如何看待黄腐酚即促氧化,又抗氧化 | 第47-48页 |
| 4.2 黄腐酚促氧化产生ROS位点的讨论 | 第48-49页 |
| 4.3 人红细胞与HL-60细胞实验结果的异同 | 第49-50页 |
| 第五章 结论 | 第50-52页 |
| 5.1 主要结论 | 第50页 |
| 5.2 实验展望 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
