| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 前言 | 第12-22页 |
| 1.1 WNT基因家族与WNT信号通路 | 第12-14页 |
| 1.1.1 WNT基因家族 | 第12页 |
| 1.1.2 WNT信号通路 | 第12-14页 |
| 1.2 WNT信号通路与人类疾病 | 第14-17页 |
| 1.2.1 WNT信号通路与肿瘤的关系 | 第14-15页 |
| 1.2.2 WNT信号通路与中枢神经系统疾病的关系 | 第15-16页 |
| 1.2.3 WNT信号通路与骨相关疾病 | 第16-17页 |
| 1.3 WNT1基因突变与XV型成骨不全 | 第17-19页 |
| 1.3.1 WNT1基因及其功能 | 第17-18页 |
| 1.3.2 WNT1基因突变与XV成骨不全 | 第18-19页 |
| 1.4 WNT1与miRNA、circRNA | 第19-22页 |
| 第二章 WNT1基因突变分析 | 第22-32页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第22-24页 |
| 2.1.1 实验样本 | 第22页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第22页 |
| 2.1.3 实验耗材 | 第22-23页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第23页 |
| 2.1.5 数据库 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-25页 |
| 2.2.1 全血基因组DNA提取 | 第24页 |
| 2.2.2 WNT1基因PCR扩增 | 第24-25页 |
| 2.2.3 DNA测序 | 第25页 |
| 2.2.4 WNT1突变位点保守性分析 | 第25页 |
| 2.2.5 WNT1基因突变效应预测 | 第25页 |
| 2.3 实验结果 | 第25-29页 |
| 2.3.1 WNT1外显子PCR扩增 | 第25-26页 |
| 2.3.2 DNA 测序结果分析 | 第26-27页 |
| 2.3.3 WNT1突变位点保守性分析 | 第27-28页 |
| 2.3.4 WNT1基因突变效应预测 | 第28-29页 |
| 2.4 讨论 | 第29-32页 |
| 第三章 WNT1基因突变对WNT信号通路及Saos-2细胞矿化的影响 | 第32-50页 |
| 3.1 材料与仪器 | 第32-33页 |
| 3.1.1 实验试剂 | 第32-33页 |
| 3.1.2 实验耗材 | 第33页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第33页 |
| 3.2 实验方法 | 第33-42页 |
| 3.2.1 DH5α感受态细胞的制备 | 第33-34页 |
| 3.2.2 WNT1基因突变表达载体构建 | 第34-39页 |
| 3.2.3 TOPflash实验 | 第39-40页 |
| 3.2.4 显性负效应实验 | 第40-41页 |
| 3.2.5 Soas-2细胞矿化实验 | 第41-42页 |
| 3.3 结果 | 第42-46页 |
| 3.3.1 pcDNA4-HisMaxC-WNT1野生型重组载体的构建 | 第42页 |
| 3.3.2 pcDNA4-HisMaxC-WNT1系列突变重组载体的构建 | 第42-44页 |
| 3.3.3 TOPflash实验 | 第44-45页 |
| 3.3.4 显性负效应实验 | 第45-46页 |
| 3.3.5 Saos-2细胞矿化实验 | 第46页 |
| 3.4 讨论 | 第46-50页 |
| 第四章 circRNA对靶向WNT1的miRNA海绵功能研究 | 第50-62页 |
| 4.1 试剂与仪器 | 第50-52页 |
| 4.1.1 实验试剂 | 第50-51页 |
| 4.1.2 实验耗材 | 第51页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第51-52页 |
| 4.2 实验方法 | 第52-57页 |
| 4.2.1 pMD19-circRNA重组T载体构建 | 第52-55页 |
| 4.2.2 pmiRGLO-circRNA重组表达载体的构建 | 第55-56页 |
| 4.2.3 pmiRGLO-circRNA重组质粒转染HEK293细胞 | 第56-57页 |
| 4.3 结果 | 第57-60页 |
| 4.3.1 circRNA成熟序列RT-PCR克隆 | 第57-58页 |
| 4.3.2 pmirGLO-circRNA重组载体构建 | 第58-59页 |
| 4.3.3 双荧光素酶报告实验 | 第59-60页 |
| 4.4 讨论 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 附录 | 第73-74页 |
