| 摘要 | 第3-9页 |
| Abstract | 第9-15页 |
| 中英文缩略词表 | 第21-23页 |
| 第一章 类似mRNA长非编码RNA mlncRNA2在颈上交感神经节介导糖尿病心脏自主神经病变中的作用及机制 | 第23-64页 |
| 引言 | 第23-25页 |
| 材料与方法 | 第25-39页 |
| 1.1 材料 | 第25-31页 |
| 1.1.1 动物 | 第25页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第25-27页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第27-28页 |
| 1.1.4 溶液配制 | 第28-31页 |
| 1.2 方法 | 第31-39页 |
| 1.2.1 建立2型糖尿病大鼠模型 | 第31-32页 |
| 1.2.2 糖尿病大鼠mlncRNA2小RNA干扰实验 | 第32页 |
| 1.2.3 大鼠血糖的测定 | 第32页 |
| 1.2.4 大鼠血压、心率测定 | 第32-33页 |
| 1.2.5 大鼠心电图和心率变异性(heart rate variability, HRV)指标的测定 | 第33页 |
| 1.2.6 动脉血压压力反射敏感性(baroreflex sensitivity, BRS) | 第33-34页 |
| 1.2.7 ELISA法实验步骤 | 第34页 |
| 1.2.8 氧化应激指标的测定 | 第34-35页 |
| 1.2.9 免疫荧光双标法 | 第35页 |
| 1.2.10 Real-time PCR技术 | 第35-37页 |
| 1.2.11 表达谱芯片 | 第37页 |
| 1.2.12 蛋白印迹 | 第37-39页 |
| 1.2.13 统计方法 | 第39页 |
| 结果 | 第39-57页 |
| 1.3.1 血糖的变化 | 第39-40页 |
| 1.3.2 血压的变化 | 第40-41页 |
| 1.3.3 心电图指标的变化 | 第41-42页 |
| 1.3.4 心率变异性 | 第42-43页 |
| 1.3.5 动脉血压压力敏感性 | 第43-44页 |
| 1.3.6 大鼠血清白细胞介素-6(IL-6) | 第44-45页 |
| 1.3.7 大鼠血清肿瘤坏死因子-a( TNF-a) | 第45-46页 |
| 1.3.8 大鼠血清去甲肾上腺素(NE) | 第46-47页 |
| 1.3.9 大鼠血清氧化应激指标 | 第47-49页 |
| 1.3.10 表达谱芯片研究mlncRNA2对基因的调控 | 第49-50页 |
| 1.3.11 免疫荧光双标 | 第50-52页 |
| 1.3.12 Real-time PCR | 第52-54页 |
| 1.3.13 蛋白印迹 | 第54-57页 |
| 讨论 | 第57-64页 |
| 第二章 高糖高脂联合作用诱导PC12细胞mlncRNA2表达 | 第64-77页 |
| 引言 | 第64-65页 |
| 材料与方法 | 第65-69页 |
| 2.1 材料 | 第65-66页 |
| 2.1.1 细胞 | 第65页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第65-66页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第66页 |
| 2.1.4 溶液配制 | 第66页 |
| 2.2 方法 | 第66-69页 |
| 2.2.1 PC12细胞培养 | 第66页 |
| 2.2.2 实验分组 | 第66-67页 |
| 2.2.3 MTT实验 | 第67-68页 |
| 2.2.4 总RNA的提取 | 第68页 |
| 2.2.5 总RNA的鉴定 | 第68页 |
| 2.2.6 Real-time PCR | 第68-69页 |
| 2.2.7 统计方法 | 第69页 |
| 结果 | 第69-74页 |
| 2.3.1 高糖对PC12细胞活力的影响 | 第69-70页 |
| 2.3.2 高脂对PC12细胞活力的影响 | 第70-71页 |
| 2.3.3 高糖对PC12细胞mlncRNA2表达的时效及量效关系 | 第71-72页 |
| 2.3.4 高脂对PC12细胞mlncRNA2表达的时效及量效关系 | 第72-73页 |
| 2.3.5 高糖高脂联合作用对PC12细胞mlncRNA2表达的影响 | 第73-74页 |
| 2.3.6 P38抑制剂SB-203580在高糖高脂联合作用诱导PC12细胞mlncRNA2表达中的作用 | 第74页 |
| 讨论 | 第74-77页 |
| 第三章 类似mRNA长非编码RNA mlncRNA2在IRS1介导高糖高脂PC12细胞突起生长抑制中的作用及机制 | 第77-99页 |
| 引言 | 第77-78页 |
| 材料与方法 | 第78-86页 |
| 3.1 材料 | 第78-80页 |
| 3.1.1 细胞 | 第78页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第78-79页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第79页 |
| 3.1.4 溶液配制 | 第79-80页 |
| 3.2 方法 | 第80-86页 |
| 3.2.1 PC12细胞培养及实验分组 | 第80-81页 |
| 3.2.2 高糖高脂PC12细胞mlncRNA2小RNA干扰实验 | 第81-82页 |
| 3.2.3 Real-time PCR技术 | 第82-84页 |
| 3.2.4 蛋白印迹 | 第84-85页 |
| 3.2.5 PC12细胞突起生长的观察 | 第85页 |
| 3.2.6 统计方法 | 第85-86页 |
| 结果 | 第86-95页 |
| 3.3.1 PC12细胞荧光转染检测 | 第86-88页 |
| 3.3.2 mlncRNA2沉默后对PC12细胞突起生长情况的影响 | 第88-90页 |
| 3.3.3 mlncRNA2沉默后对IRS1 mRNA表达的影响 | 第90页 |
| 3.3.4 mlncRNA2沉默后对IRS1及p-IRS1 Ser302蛋白表达的影响 | 第90-92页 |
| 3.3.5 P38信号通路在高糖高脂mlncRNA2介导IRS1及p-IRS1 Ser302蛋白变化中的作用 | 第92-94页 |
| 3.3.6 P38信号通路在高糖高脂mlncRNA2介导PC12细胞突起生长抑制中的作用 | 第94-95页 |
| 讨论 | 第95-99页 |
| 第四章 类似mRNA的非编码RNA mlncRNA2在高糖高脂P2X_7介导PC12细胞炎性反应中的作用及机制 | 第99-118页 |
| 引言 | 第99-101页 |
| 材料与方法 | 第101-105页 |
| 4.1 材料 | 第101-103页 |
| 4.1.1 细胞 | 第101页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第101-102页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第102页 |
| 4.1.4 溶液配制 | 第102-103页 |
| 4.2 方法 | 第103-105页 |
| 4.2.1 PC12细胞培养及实验分组 | 第103-104页 |
| 4.2.2 高糖高脂PC12细胞mlncRNA2小RNA干扰实验 | 第104页 |
| 4.2.3 Real-time PCR技术 | 第104页 |
| 4.2.4 蛋白印迹 | 第104页 |
| 4.2.5 ELISA实验步骤 | 第104页 |
| 4.2.6 细胞内钙信号测定 | 第104-105页 |
| 4.2.7 统计方法 | 第105页 |
| 结果 | 第105-114页 |
| 4.3.1 mlncRNA2沉默后对PC12细胞ATP或BzATP诱导IL-6分泌的影响 | 第105-106页 |
| 4.3.2 mlncRNA2沉默后对PC12细胞ATP或BzATP诱导TNF-α分泌的影响 | 第106-107页 |
| 4.3.3 mlncRNA2沉默后对P2X_7 mRNA表达的影响 | 第107-108页 |
| 4.3.4 mlncRNA2沉默后对P2X_7蛋白表达的影响 | 第108-109页 |
| 4.3.5 mlncRNA2沉默后对PC12细胞内ATP或BzATP诱导的钙信号的影响 | 第109-110页 |
| 4.3.6 P38信号通路在高糖高脂mlncRNA2介导P2X_7蛋白变化中的作用 | 第110-111页 |
| 4.3.7 P38信号通路在高糖高脂mlncRNA2介导PC12细胞ATP或BzATP诱导IL-6分泌中的作用 | 第111-112页 |
| 4.3.8 P38信号通路在高糖高脂mlncRNA2介导PC12细胞ATP或BzATP诱导TNF-α分泌中的作用 | 第112-113页 |
| 4.3.9 P38信号通路在高糖高脂mlncRNA2介导PC12细胞内ATP或BzATP诱导的钙信号改变中的作用 | 第113-114页 |
| 讨论 | 第114-118页 |
| 第五章 高脂通过P38 MAPK信号通路诱导PC12细胞P2X_7表达和IL-6释放 | 第118-133页 |
| 引言 | 第118-119页 |
| 材料与方法 | 第119-122页 |
| 5.1 材料 | 第119-120页 |
| 5.1.1 细胞 | 第119页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第119-120页 |
| 5.1.3 主要仪器 | 第120页 |
| 5.1.4 溶液配制 | 第120页 |
| 5.2 方法 | 第120-122页 |
| 5.2.1 PC12细胞培养 | 第120-121页 |
| 5.2.2 高脂PC12细胞P2X_7小RNA干扰实验 | 第121页 |
| 5.2.3 Real-time PCR技术 | 第121-122页 |
| 5.2.4 蛋白印迹 | 第122页 |
| 5.2.5 ELISA实验步骤 | 第122页 |
| 5.2.6 细胞内钙信号测定 | 第122页 |
| 5.2.7 免疫荧光法 | 第122页 |
| 5.2.8 统计方法 | 第122页 |
| 结果 | 第122-131页 |
| 5.3.1 高脂诱导PC12细胞P2X_7 mRNA表达 | 第122-123页 |
| 5.3.2 高脂诱导PC12细胞P2X_7蛋白表达 | 第123-124页 |
| 5.3.3 高脂诱导PC12细胞IL-6释放 | 第124-125页 |
| 5.3.4 高脂培养增强PC12细胞ATP或BzATP诱导的钙信号 | 第125-126页 |
| 5.3.5 高脂诱导PC12细胞P38 MAPK通路的激活 | 第126-127页 |
| 5.3.6 P38 MAPK通路抑制剂SB-203580抑制高脂诱导的P2X_7上调 | 第127-128页 |
| 5.3.7 抑制P2X_7表达使PC12细胞ATP或BzATP诱导的钙信号减低和IL-6释放减少 | 第128-131页 |
| 讨论 | 第131-133页 |
| 第六章 结论 | 第133-134页 |
| 致谢 | 第134-135页 |
| 参考文献 | 第135-145页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第145-146页 |
| 综述一 | 第146-161页 |
| 参考文献 | 第156-161页 |
| 综述二 | 第161-169页 |
| 参考文献 | 第168-169页 |
