| 个人简历 | 第3-7页 |
| 英文缩略词表 | 第7-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 前言 | 第14-20页 |
| 参考文献 | 第17-20页 |
| 第一部分 体外验证GCF2对肝癌细胞迁移侵袭的作用 | 第20-38页 |
| 1 实验材料 | 第20-22页 |
| 1.1 细胞株 | 第20页 |
| 1.2 主要仪器及耗材 | 第20-21页 |
| 1.3 主要试剂 | 第21页 |
| 1.4 抗体 | 第21页 |
| 1.5 siRNA合成 | 第21页 |
| 1.6 引物 | 第21-22页 |
| 2 实验方法 | 第22-31页 |
| 2.1 siRNA转染肝癌细胞株 | 第22-24页 |
| 2.2 实时荧光定量PCR检测siRNA-GCF2干扰效率 | 第24-26页 |
| 2.3. Western blot检测siRNA-GCF2干扰效率 | 第26-29页 |
| 2.4 肝癌细胞株侵袭实验 | 第29-30页 |
| 2.5 肝癌细胞株迁移实验 | 第30页 |
| 2.6 统计分析处理 | 第30-31页 |
| 3 结果 | 第31-35页 |
| 3.1 肝癌细胞株RNA的浓度纯度测定和质量评估 | 第31页 |
| 3.2 cDNA质量检测 | 第31-32页 |
| 3.3 实时荧光定量PCR检测siRNA-GCF2干扰效率 | 第32-33页 |
| 3.4 Western blot检测siRNA-GCF2干扰效率 | 第33-34页 |
| 3.5 GCF2蛋白表达降低抑制肝癌细胞迁移侵袭的能力 | 第34-35页 |
| 4. 讨论 | 第35-37页 |
| 参考文献 | 第37-38页 |
| 第二部分 GCF2下调对裸鼠原位种植人肝癌细胞迁移侵袭能力的影响 | 第38-52页 |
| 1 实验材料 | 第38页 |
| 1.1 主要仪器及耗材 | 第38页 |
| 1.2 实验动物 | 第38页 |
| 2 实验方法 | 第38-44页 |
| 2.1 shRNA-GCF2慢病毒载体构建 | 第38页 |
| 2.2 细胞株耐受嘌呤霉素浓度筛选 | 第38-39页 |
| 2.3 最佳MOI值确定 | 第39-40页 |
| 2.4 稳定转染肝癌细胞株的构建 | 第40-41页 |
| 2.5 荷人肝癌细胞裸鼠模型的建立 | 第41-42页 |
| 2.6 裸鼠解剖 | 第42页 |
| 2.7 石蜡切片的制备及HE染色 | 第42-43页 |
| 2.8 统计分析 | 第43-44页 |
| 3. 结果 | 第44-49页 |
| 3.1 三种细胞株耐受嘌呤浓度的筛选及最佳MOI值的确定 | 第44页 |
| 3.2 慢病毒稳定转染肝癌细胞的鉴定结果 | 第44-45页 |
| 3.3 肝癌细胞株成瘤性检测结果 | 第45页 |
| 3.4 荷人肝癌细胞裸鼠体内沉默GCF2结果 | 第45-49页 |
| 4. 讨论 | 第49-51页 |
| 4.1 体内实验验证沉默GCF2对肝癌迁移侵袭抑制作用 | 第49页 |
| 4.2 裸鼠人肝癌模型构建方法的探讨 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-52页 |
| 第三部分 GCF2调控与迁移侵袭相关候选靶基因的验证 | 第52-68页 |
| 1 实验材料 | 第52-54页 |
| 1.1 主要仪器及耗材 | 第52页 |
| 1.2 主要试剂 | 第52-53页 |
| 1.3 抗体 | 第53页 |
| 1.4 菌株和质粒 | 第53-54页 |
| 2 实验方法 | 第54-60页 |
| 2.1 候选靶基因的初步鉴定 | 第54-55页 |
| 2.2 GCF2对候选靶基因启动子活性影响的检测 | 第55-59页 |
| 2.3 统计学分析 | 第59-60页 |
| 3 结果 | 第60-64页 |
| 3.1 实时荧光定量PCR检测候选靶基因 | 第60页 |
| 3.2 Western Blot候选检测靶基因 | 第60-61页 |
| 3.3 pGL3- Galectin-1荧光素酶报告基因重组质粒的构建及鉴定 | 第61-62页 |
| 3.4 GCF2对Galectin-1启动子活性影响的检测结果 | 第62-64页 |
| 4. 讨论 | 第64-66页 |
| 4.1 GCF2候选靶基因验证结果 | 第64页 |
| 4.2 Galectin-1在肿瘤中的作用及影响肝癌细胞转移的可能机制 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-68页 |
| 全文小结 | 第68-69页 |
| 问题与展望 | 第69-70页 |
| 综述 | 第70-82页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第83页 |
