| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 1.前言 | 第9-14页 |
| 1.1 中国卤虫 | 第9-10页 |
| 1.1.1 中国卤虫的特征及价值 | 第9页 |
| 1.1.2 中国卤虫的滞育 | 第9-10页 |
| 1.2 ATF4蛋白 | 第10-11页 |
| 1.3 内质网应激及相关的CHOP蛋白和eIF2α蛋白 | 第11-13页 |
| 1.4 研究的目的及意义 | 第13-14页 |
| 2.材料与方法 | 第14-29页 |
| 2.1 材料 | 第14-19页 |
| 2.1.1 卤虫的孵化及培养 | 第14页 |
| 2.1.2 主要药品及试剂 | 第14-18页 |
| 2.1.2.1 基因实验相关药剂 | 第14-16页 |
| 2.1.2.2 原核表达相关试剂 | 第16页 |
| 2.1.2.3 重组蛋白纯化相关试剂 | 第16-17页 |
| 2.1.2.4 免疫荧光试剂 | 第17页 |
| 2.1.2.5 Westernblot试剂 | 第17-18页 |
| 2.1.3 主要设备仪器 | 第18-19页 |
| 2.2 方法 | 第19-28页 |
| 2.2.1 总RNA提取 | 第19页 |
| 2.2.2 模板的制备 | 第19-21页 |
| 2.2.2.1 普通模版 | 第19-20页 |
| 2.2.2.2 RACE模版 | 第20-21页 |
| 2.2.3 引物的获得 | 第21页 |
| 2.2.3.1 表达序列标签引物 | 第21页 |
| 2.2.3.2 5’和3’引物的获得 | 第21页 |
| 2.2.4 基因的克隆 | 第21-23页 |
| 2.2.5 原核表达 | 第23-24页 |
| 2.2.6 实时荧光定量PCR | 第24-25页 |
| 2.2.7 蛋白纯化及包涵体复性 | 第25-26页 |
| 2.2.8 WesternBlot | 第26-27页 |
| 2.2.9 免疫荧光 | 第27-28页 |
| 2.2.9.1 石蜡切片 | 第27页 |
| 2.2.9.2 免疫荧光 | 第27-28页 |
| 2.3 生物信息学分析和生物统计 | 第28-29页 |
| 3.结果 | 第29-45页 |
| 3.1 基因克隆 | 第29-31页 |
| 3.1.1 EST | 第29页 |
| 3.1.2 As-ATF4基因3’端序列的获得 | 第29-30页 |
| 3.1.3 As-ATF4基因5’端序列的获得 | 第30页 |
| 3.1.4 As-ATF4基因全长序列 | 第30-31页 |
| 3.2 As-ATF4生物信息学分析 | 第31-34页 |
| 3.3 ATF4分子进化分析 | 第34-36页 |
| 3.4 As-ATF4基因表达模式 | 第36-39页 |
| 3.4.1 不同发育时期的As-ATF4基因的表达模式 | 第36-37页 |
| 3.4.2 .盐度胁迫下As-ATF4基因的表达模式 | 第37-38页 |
| 3.4.3 温度胁迫下As-ATF4基因的表达模式 | 第38-39页 |
| 3.5 As-ATF4重组蛋白的表达与纯化 | 第39-42页 |
| 3.5.1 As-ATF4重组蛋白的诱导表达 | 第39-40页 |
| 3.5.2 检测As-ATF4重组蛋白可溶性 | 第40-41页 |
| 3.5.3 As-ATF4纯化 | 第41-42页 |
| 3.6 Westernblot | 第42-44页 |
| 3.6.1 在中国卤虫不同发育时期的表达 | 第42-43页 |
| 3.6.2 在低温刺激下的表达 | 第43-44页 |
| 3.7 As-ATF4的免疫荧光分析 | 第44-45页 |
| 4.讨论 | 第45-50页 |
| 4.1 中国卤虫ATF4基因的结构特点 | 第45页 |
| 4.2 As-ATF4在中国卤虫0h,15h,3d的表达部位 | 第45页 |
| 4.3 As-ATF4在中国卤虫早期胚胎发育过程中的表达模式 | 第45-47页 |
| 4.4 As-ATF4在中国卤虫滞育胚胎胁迫应答过程中的表达 | 第47-48页 |
| 4.5 As-ATF4的调控过程 | 第48-50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
