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灵芝全局性调控基因LaeA的克隆及其在灵芝酸生物合成过程中的差异表达

摘要第2-4页
Abstract第4-5页
中文文摘第6-12页
绪论第12-22页
    1. 灵芝的概述第12-14页
        1.1 灵芝的种类与分布第12-13页
        1.2 灵芝的功能成分及其生理作用第13-14页
            1.2.1 灵芝多糖第13页
            1.2.2 蛋白多肽类化合物第13页
            1.2.3 微量元素第13-14页
    2. 灵芝酸及灵芝酸的代谢调控第14-18页
        2.1 灵芝酸的化学结构第14-15页
        2.2 灵芝酸的药理活性第15-16页
            2.2.1 抗癌作用第15页
            2.2.2 护肝作用第15页
            2.2.3 降血压作用第15-16页
            2.2.4 抗HIV-1作用第16页
            2.2.5 其他药理活性第16页
        2.3 灵芝酸的发酵生产第16-17页
        2.4 灵芝酸生物合成途径和调控机制第17-18页
    3. 真菌全局性调控因子LaeA第18-21页
        3.1 LaeA的结构特征第18-19页
        3.2 LaeA在丝状真菌次级代谢调控中的作用第19-20页
        3.3 LaeA在丝状真菌形态发育中的作用第20页
        3.4 LaeA的作用机制研究第20-21页
    4. 本论文立题的目的和意义第21-22页
第一章 灵芝LaeA基因的电子克隆及特征分析第22-40页
    1. 材料与方法第22-27页
        1.1 材料第22-23页
            1.1.1 菌种第22页
            1.1.2 培养基第22-23页
            1.1.3 主要试剂与仪器第23页
        1.2 方法第23-27页
            1.2.1 引物设计第23-24页
            1.2.2 LaeA基因的cDNA序列的获得第24页
            1.2.3 灵芝LaeA编码基因的实验验证第24-26页
            1.2.4 灵芝LaeA全长基因序列的获得第26页
            1.2.5 灵芝LaeA蛋白的生物信息学分析第26-27页
    2. 结果和分析第27-39页
        2.1 灵芝LaeA基因的cDNA序列的获得第27-30页
        2.2 灵芝LaeA基因cDNA的实验验证第30-32页
            2.2.1 灵芝RNA的验证第30-31页
            2.2.2 灵芝LaeA编码基因PCR验证第31页
            2.2.3 灵芝LaeA基因cDNA编码序列第31-32页
        2.3 灵芝LaeA基因全长序列分析第32-34页
        2.4 灵芝LaeA蛋白的生物信息学分析第34-39页
            2.4.1 灵芝LaeA蛋白序列分析及功能鉴定第34-35页
            2.4.2 LaeA蛋白物理化学性质分析第35页
            2.4.3 蛋白质的亲疏水性分析第35-36页
            2.4.4 亚细胞定位分析第36页
            2.4.5 蛋白质信号肽分析第36-37页
            2.4.6 蛋白质二级结构分析第37页
            2.4.7 同源建模分析蛋白质三级结构第37-38页
            2.4.8 蛋白质系统进化分析第38-39页
    3. 小结与讨论第39-40页
第二章 灵芝LaeA基因在大肠杆菌中的异源表达第40-54页
    1. 材料与方法第40-47页
        1.1 材料第40-41页
            1.1.1 菌种与质粒第40页
            1.1.2 培养基及主要药品第40页
            1.1.3 主要试剂和仪器第40-41页
        1.2 方法第41-47页
            1.2.1 引物设计第41-42页
            1.2.2 含酶切位点LaeA基因的获得第42页
            1.2.3 LaeA基因的快速胶回收第42-43页
            1.2.4 LaeA基因重组克隆载体的构建及验证第43-44页
            1.2.5 菌液PCR验证及测序第44页
            1.2.6 LaeA基因重组克隆质粒提取及验证第44-45页
            1.2.7 LaeA基因重组表达载体的构建及验证第45-46页
            1.2.8 重组大肠杆菌BL21(DE_3)的诱导表达第46-47页
            1.2.9 SDS-PAGE电泳检测第47页
    2. 结果和分析第47-52页
        2.1 LaeA基因编码序列的克隆第47-48页
        2.2 重组克隆载体的构建和验证第48-49页
        2.3 重组表达载体的构建和验证第49-51页
        2.4 LaeA-pET32a重组菌诱导表达以及SDS-PAGE电泳分析第51-52页
    3 小结与讨论第52-54页
第三章 液体振荡和液体静置培养方式下灵芝酸的生产及LaeA基因表达差异分析第54-68页
    1. 材料与方法第54-60页
        1.1 材料第54-56页
            1.1.1 菌种第54页
            1.1.2 主要试剂第54页
            1.1.3 主要仪器第54-55页
            1.1.4 培养基与试剂第55-56页
        1.2 方法第56-60页
            1.2.1 灵芝细胞发酵培养第56页
            1.2.2 灵芝细胞干重、发酵液残糖、灵芝酸含量分析第56-58页
            1.2.3 LaeA荧光实时定量PCR检测方法的建立及其表达分析第58-60页
    2. 实验结果与讨论第60-66页
        2.1 两种发酵培养方式下灵芝细胞生长量变化分析第60页
        2.2 两种发酵培养方式下发酵液中残糖量变化分析第60-62页
            2.2.1 残糖标准曲线的绘制第60-61页
            2.2.2 发酵液中残糖含量的变化分析第61-62页
        2.3 灵芝酸合成动力学分析第62-64页
        2.4 LaeA荧光实时定量PCR检测方法的建立及其表达分析第64-66页
            2.4.1 内参基因和目的基因标准曲线的建立第64-65页
            2.4.2 半定量分析灵芝细胞LaeA基因表达量第65-66页
    3 小结与讨论第66-68页
第四章 结论第68-72页
参考文献第72-80页
攻读学位期间承担的科研任务与主要成果第80-82页
致谢第82-84页
个人简历第84-86页

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