| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-10页 |
| 第1章 前言 | 第10-30页 |
| 1.两栖类简介 | 第10-17页 |
| ·两栖类动物的分类与特征 | 第10页 |
| ·两栖类的价值 | 第10-12页 |
| ·两栖类是世界动物资源的重要组成部分 | 第10-11页 |
| ·两栖类具有重大的药用价值 | 第11页 |
| ·两栖类是重要的环境指示动物和科研动物 | 第11-12页 |
| ·两栖类动物种群衰退及其原因 | 第12-17页 |
| ·人类活动所引起的生境破坏与丧失 | 第12-13页 |
| ·人为的过度捕捉 | 第13-14页 |
| ·环境污染 | 第14页 |
| ·紫外线辐射 | 第14-15页 |
| ·外来物种入侵 | 第15-16页 |
| ·气候变化 | 第16页 |
| ·病菌感染 | 第16-17页 |
| 2.中国林蛙 | 第17-20页 |
| ·中国林蛙的特点、分布及价值 | 第17-19页 |
| ·中国林蛙的特点 | 第17-18页 |
| ·中国林蛙的分布 | 第18页 |
| ·中国林蛙的价值 | 第18-19页 |
| ·中国林蛙的研究现状 | 第19-20页 |
| 3.细菌鉴定 | 第20-22页 |
| ·传统的细菌鉴定方法 | 第20-21页 |
| ·形态学鉴定 | 第20页 |
| ·生理生化鉴定 | 第20-21页 |
| ·细菌的自动化鉴定 | 第21页 |
| ·化学分类归类 | 第21页 |
| ·新型细菌鉴定方法 | 第21-22页 |
| 4.细菌群落结构的变性梯度凝胶电泳(DGGE)分析 | 第22-27页 |
| ·DGGE技术的原理 | 第23-24页 |
| ·操作步骤 | 第24页 |
| ·DGGE技术的关键环节和系统优化 | 第24-26页 |
| ·样品中细菌总DNA的提取 | 第24-25页 |
| ·16S rDNA片段的PCR扩增 | 第25页 |
| ·凝胶浓度和最佳变性剂梯度的确定 | 第25-26页 |
| ·电泳温度与时间的确定 | 第26页 |
| ·DGGE技术的应用 | 第26-27页 |
| ·DGGE技术的缺陷 | 第27页 |
| 5.研究意义和目的 | 第27-30页 |
| 第2章 秦岭山区中国林蛙致病菌的分离鉴定 | 第30-44页 |
| 1.引言 | 第30页 |
| 2.材料与方法 | 第30-37页 |
| ·实验材料 | 第30-33页 |
| ·实验动物 | 第30页 |
| ·主要试剂 | 第30-31页 |
| ·培养基 | 第31-32页 |
| ·仪器 | 第32-33页 |
| ·病蛙检查 | 第33页 |
| ·病菌的分离 | 第33页 |
| ·中国林蛙回归感染实验 | 第33页 |
| ·细菌部分16S rDNA序列分析 | 第33-35页 |
| ·细菌基因组DNA的提取 | 第33-34页 |
| ·细菌部分16S rDNA序列的扩增 | 第34-35页 |
| ·16S rDNA序列分析 | 第35页 |
| ·病原菌的形态学观察及生理生化试验 | 第35-37页 |
| ·形态学观察 | 第35页 |
| ·生理生化特性实验 | 第35-37页 |
| 3.结果与分析 | 第37-42页 |
| ·染病中国林蛙检查结果 | 第37-38页 |
| ·病菌的分离 | 第38页 |
| ·回归感染实验 | 第38-39页 |
| ·菌株的形态学观察 | 第39页 |
| ·菌株的16S rDNA序列分析 | 第39-41页 |
| ·各菌株的基因组DNA提取 | 第39页 |
| ·各菌株16S rDNA部分片段的扩增 | 第39-40页 |
| ·细菌16S rDNA序列测定与分析 | 第40-41页 |
| ·菌株的生理生化实验结果 | 第41-42页 |
| 4.讨论 | 第42-44页 |
| 第3章 中国林蛙不同生境中的微生物群落结构分析 | 第44-66页 |
| 1.引言 | 第44页 |
| 2.材料与方法 | 第44-55页 |
| ·材料 | 第44-47页 |
| ·土壤及水体样品 | 第44-45页 |
| ·试剂及缓冲液的配制 | 第45-47页 |
| ·培养基 | 第47页 |
| ·仪器 | 第47页 |
| ·样品中基因组DNA的提取 | 第47-49页 |
| ·土壤样品中细菌基因组总DNA的提取 | 第47-48页 |
| ·水体中细菌基因组总DNA的提取 | 第48-49页 |
| ·样品中细菌16S rDNA序列的巢式PCR扩增 | 第49-51页 |
| ·细菌16S rDNA巢式PCR第一轮扩增 | 第49-50页 |
| ·细菌16S rDNA巢式PCR第二轮扩增 | 第50页 |
| ·PCR产物纯化 | 第50-51页 |
| ·细菌16S rDNA序列的DGGE分析 | 第51-53页 |
| ·DGGE垂直变性梯度凝胶电泳 | 第51-53页 |
| ·DGGE平行变性梯度凝胶电泳 | 第53页 |
| ·DGGE图谱分析 | 第53页 |
| ·DGGE图谱中特异性条带的回收及序列分析 | 第53-55页 |
| ·DGGE图谱中特异条带的切割回收 | 第53-54页 |
| ·切割条带的PCR扩增 | 第54页 |
| ·PCR扩增产物的DGGE分离 | 第54页 |
| ·回收片段的克隆 | 第54-55页 |
| ·克隆的筛选 | 第55页 |
| ·DGEE图谱中特异性条带的序列分析 | 第55页 |
| 3. 结果与分析 | 第55-63页 |
| ·样品中细菌基因组总DNA的提取 | 第55-56页 |
| ·细菌16S rDNA序列扩增 | 第56-58页 |
| ·细菌16S rDNA巢式PCR第一轮扩增 | 第56-57页 |
| ·细菌16S rDNA巢式PCR第二轮扩增 | 第57页 |
| ·PCR扩增产物的纯化 | 第57-58页 |
| ·细菌16S rDNA序列的DGGE分析 | 第58-60页 |
| ·DGGE垂直变性梯度凝胶电泳 | 第58页 |
| ·DGGE平行变性梯度凝胶电泳 | 第58-59页 |
| ·DGGE图谱的Quantity One软件分析 | 第59-60页 |
| ·DGGE图谱中特异性条带的回收,克隆及序列分析 | 第60-63页 |
| ·回收条带的DGGE筛选 | 第60-61页 |
| ·回收条带克隆的菌落PCR筛选 | 第61-62页 |
| ·回收条带克隆的DGGE筛选 | 第62-63页 |
| ·回收条带的序列分析 | 第63页 |
| 4. 讨论 | 第63-66页 |
| 总结 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 致谢 | 第74-76页 |
| 攻读硕士学位期间研究成果 | 第76-77页 |