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二氧化硅诱导的肺泡巨噬细胞内质网应激与凋亡机制研究

摘要第4-6页
Abstract第6-7页
目录第8-10页
符号说明第10-11页
实验技术路线第11-12页
前言第12-14页
1 材料与方法第14-31页
    1.1 实验材料第14-18页
        1.1.1 细胞系第14页
        1.1.2 药物第14页
        1.1.3 主要实验仪器第14-15页
        1.1.4 主要实验试剂第15页
        1.1.5 主要实验抗体第15页
        1.1.6 主要实验试剂盒第15-16页
        1.1.7 实验常用工作液配制第16-18页
    1.2 实验方法第18-30页
        1.2.1 细胞培养第18-19页
        1.2.2 SiO_2处理RAW264.7细胞方法第19-20页
        1.2.3 电子显微镜观察RAW264.7细胞形态第20-21页
        1.2.4 Real-time PCR检测mRNA变化第21-24页
        1.2.5 Western bloting检测蛋白质的变化第24-29页
        1.2.6 MTT法测定细胞增殖第29页
        1.2.7 DAPI染色观察细胞凋亡第29页
        1.2.8 流式细胞仪中Annexin V-FITC and PI Kit检测细胞凋亡第29-30页
    1.3 统计学处理第30-31页
2 结果第31-45页
    2.1 电镜观察SiO_2诱导RAW264.7细胞的超微形态改变第31-33页
    2.2 SiO_2诱导RAW264.7细胞内质网应激标志物的表达第33-35页
        2.2.1 Real-time PCR检测内质网应激标志物mRNA的表达第33-34页
        2.2.2 Western blot检测内质网应激标志物蛋白的表达第34-35页
    2.3 SiO_2诱导RAW264.7细胞发生凋亡第35-38页
        2.3.1 MTT法检测细胞增殖第35-36页
        2.3.2 DAPI法观察细胞凋亡情况第36-37页
        2.3.3 流式细胞术检测细胞凋亡率第37-38页
        2.3.4 Western blot检测细胞中cleaved caspase-3蛋白的表达第38页
    2.4 使用特异性阻断剂4-PBA抑制内质网应激第38-40页
        2.4.1 Real time PCR验证4-PBA抑制内质网应激标志物mRNA的表达第38-40页
        2.4.2 Western blot验证4-PBA抑制内质网应激标志物蛋白的表达第40页
    2.5 使用特异性阻断剂4-PBA抑制细胞发生凋亡第40-45页
        2.5.1 MTT法检测使用4-PBA后细胞增殖第40-41页
        2.5.2 DAPI法观察使用4-PBA后细胞凋亡情况第41-43页
        2.5.3 流式细胞术检测使用4-PBA后细胞凋亡率第43-44页
        2.5.4 Western blot检测使用4-PBA后细胞中cleaved caspase-3蛋白的表达第44-45页
3 讨论第45-50页
4 结论第50-51页
参考文献第51-57页
综述第57-64页
    参考文献第62-64页
攻读学位期间主要成果第64-65页
致谢第65页

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