| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-16页 |
| 第1章 绪论 | 第16-37页 |
| ·手性化学品的由来和发展 | 第16-18页 |
| ·生物催化在手性化学品合成中的应用 | 第18-21页 |
| ·薄荷醇简介 | 第21-22页 |
| ·l-薄荷醇的应用 | 第22-23页 |
| ·l-薄荷醇的研究现状 | 第23-34页 |
| ·天然提取研究 | 第24页 |
| ·化学合成研究 | 第24-28页 |
| ·以萜烯酮为原料合成 | 第24-25页 |
| ·以萜醛为原料合成 | 第25-26页 |
| ·以萜醇为原料合成 | 第26页 |
| ·以百里香酚或间甲酚为原料合成 | 第26-27页 |
| ·以异戊二烯为原料合成 | 第27-28页 |
| ·生物催化合成研究 | 第28-34页 |
| ·酶促酯化或转酯化反应 | 第29-33页 |
| ·酶促酯水解反应 | 第33-34页 |
| ·本课题研究的目的和意义 | 第34-35页 |
| ·研究的目的 | 第34-35页 |
| ·研究的意义 | 第35页 |
| ·本课题研究的主要内容 | 第35-37页 |
| 第2章 对映选择性水解dl-薄荷酯的生物催化剂筛选 | 第37-52页 |
| ·前言 | 第37-38页 |
| ·筛选模型 | 第38-39页 |
| ·材料与方法 | 第39-43页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第39页 |
| ·土样 | 第39页 |
| ·培养基 | 第39-40页 |
| ·分析方法 | 第40页 |
| ·薄板层析分析 | 第40页 |
| ·气相色谱分析 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-43页 |
| ·外消旋乙酸薄荷酯的化学合成 | 第40-41页 |
| ·土样采集 | 第41页 |
| ·富集培养 | 第41页 |
| ·纯种分离 | 第41页 |
| ·菌株初筛 | 第41-42页 |
| ·菌株复筛 | 第42页 |
| ·底物耐受性考察 | 第42页 |
| ·菌种鉴定 | 第42-43页 |
| ·结果与讨论 | 第43-51页 |
| ·外消旋乙酸薄荷酯的化学合成 | 第43页 |
| ·产物薄荷醇浓度的测定 | 第43-44页 |
| ·富集培养结果 | 第44页 |
| ·纯种分离结果 | 第44页 |
| ·初筛结果 | 第44-45页 |
| ·复筛结果 | 第45-47页 |
| ·底物耐受性考察结果 | 第47-48页 |
| ·最终筛选结果 | 第48页 |
| ·筛选的微生物催化剂与商品脂肪酶的比较 | 第48-49页 |
| ·菌株鉴定结果 | 第49-51页 |
| ·本章小结 | 第51-52页 |
| 第3章 枯草芽孢杆菌酯酶催化dl-乙酸薄荷酯水解反应的过程研究 | 第52-64页 |
| ·前言 | 第52页 |
| ·材料与方法 | 第52-56页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第52-53页 |
| ·菌种及酶 | 第53页 |
| ·培养基 | 第53页 |
| ·分析方法 | 第53-55页 |
| ·酯酶活力测定 | 第53-54页 |
| ·薄板层析分析 | 第54页 |
| ·气相色谱分析 | 第54-55页 |
| ·实验方法 | 第55-56页 |
| ·外消旋薄荷酯的化学合成 | 第55页 |
| ·菌种的培养 | 第55页 |
| ·酯酶的制备 | 第55页 |
| ·最适底物的考察 | 第55-56页 |
| ·最适反应温度的考察 | 第56页 |
| ·最适反应pH的考察 | 第56页 |
| ·BSE耐受性考察 | 第56页 |
| ·l-薄荷醇的克级制备 | 第56页 |
| ·结果与讨论 | 第56-63页 |
| ·外消旋薄荷酯的化学合成 | 第57-58页 |
| ·枯草芽孢杆菌ECU0554的生长及产酶 | 第58-59页 |
| ·最适底物的选择 | 第59-60页 |
| ·pH对BSE水解反应的影响 | 第60页 |
| ·温度对BSE水解反应的影响 | 第60-61页 |
| ·BSE在不同底物浓度下的催化反应 | 第61-62页 |
| ·l-薄荷醇的克级制备 | 第62-63页 |
| ·本章小结 | 第63-64页 |
| 第4章 枯草芽孢杆菌酯酶基因的克隆表达 | 第64-74页 |
| ·前言 | 第64页 |
| ·材料与方法 | 第64-68页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第64-65页 |
| ·菌株与质粒载体 | 第65页 |
| ·培养基 | 第65页 |
| ·引物 | 第65页 |
| ·分析方法 | 第65-66页 |
| ·酯酶活力测定 | 第65页 |
| ·蛋白含量测定 | 第65-66页 |
| ·实验方法 | 第66-68页 |
| ·目标酯酶的活性电泳分析 | 第66页 |
| ·引物设计 | 第66页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第66-67页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第67页 |
| ·表达载体的构建 | 第67-68页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第68页 |
| ·重组大肠杆菌与野生型枯草芽孢杆菌的发酵培养及产酶 | 第68页 |
| ·目的蛋白的分离纯化 | 第68页 |
| ·结果与讨论 | 第68-73页 |
| ·目标酯酶的分子量测定 | 第68-69页 |
| ·枯草芽孢杆菌基因组DNA的提取 | 第69页 |
| ·PCR扩增结果 | 第69-71页 |
| ·重组质粒的构建 | 第71页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第71-72页 |
| ·重组大肠杆菌与野生型枯草芽孢杆菌发酵产酶比较 | 第72页 |
| ·重组蛋白的分离纯化 | 第72-73页 |
| ·本章小结 | 第73-74页 |
| 第5章 重组酯酶催化dl-乙酸薄荷酯水解反应的过程研究 | 第74-84页 |
| ·前言 | 第74页 |
| ·材料与方法 | 第74-76页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第74页 |
| ·菌种及培养基 | 第74页 |
| ·分析方法 | 第74-75页 |
| ·酯酶活力测定 | 第75页 |
| ·气相色谱分析 | 第75页 |
| ·实验方法 | 第75-76页 |
| ·重组大肠杆菌的发酵培养 | 第75页 |
| ·重组酯酶的制备 | 第75页 |
| ·重组酯酶对不同底物的催化水解 | 第75-76页 |
| ·重组整细胞催化的酯水解反应 | 第76页 |
| ·扩大规模的酯水解反应 | 第76页 |
| ·结果与讨论 | 第76-83页 |
| ·重组酯酶的底物特异性 | 第76-77页 |
| ·重组酯酶对不同底物的水解 | 第77页 |
| ·重组大肠杆菌整细胞对dl-乙酸薄荷酯的催化水解 | 第77-79页 |
| ·助溶剂的优化 | 第79-81页 |
| ·催化剂上载量的优化 | 第81-82页 |
| ·底物上载量的优化 | 第82页 |
| ·优化反应过程的扩大 | 第82-83页 |
| ·本章小结 | 第83-84页 |
| 第6章 重组酯酶的固定化 | 第84-95页 |
| ·前言 | 第84-85页 |
| ·材料与方法 | 第85-87页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第85页 |
| ·菌种及培养基 | 第85页 |
| ·分析方法 | 第85-86页 |
| ·酯酶活力测定 | 第86页 |
| ·蛋白含量测定 | 第86页 |
| ·气相色谱分析 | 第86页 |
| ·实验方法 | 第86-87页 |
| ·重组大肠杆菌的发酵及酯酶的制备 | 第86页 |
| ·固定化酶的制备 | 第86-87页 |
| ·固定化酶与游离酶的热稳定性测定 | 第87页 |
| ·固定化酶与游离酶的动力学参数测定 | 第87页 |
| ·固定化酶的操作稳定性考察 | 第87页 |
| ·结果与讨论 | 第87-94页 |
| ·沉淀剂对固定化的影响 | 第87-88页 |
| ·沉淀剂浓度对固定化的影响 | 第88页 |
| ·酶浓度对固定化的影响 | 第88-89页 |
| ·交联剂浓度对固定化的影响 | 第89-90页 |
| ·固定化酶的制备结果 | 第90-91页 |
| ·固定化酶与游离酶的热稳定性比较 | 第91-92页 |
| ·固定化酶与游离酶的动力学参数比较 | 第92-93页 |
| ·固定化酶的操作稳定性 | 第93-94页 |
| ·本章小结 | 第94-95页 |
| 第7章 总结和展望 | 第95-99页 |
| ·全文总结 | 第95-96页 |
| ·论文创新点 | 第96-97页 |
| ·工作展望 | 第97-99页 |
| 参考文献 | 第99-109页 |
| 攻读博士期间论文发表和专利公开情况 | 第109-111页 |
| 致谢 | 第111-112页 |
| 附录 | 第112-117页 |
| 附表 | 第117页 |
