| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第11-23页 |
| 1.1 生物固氮与根瘤菌 | 第11-15页 |
| 1.1.1 生物固氮及其研究现状 | 第11-12页 |
| 1.1.2 根瘤菌 | 第12-13页 |
| 1.1.3 根瘤菌的起源和进化 | 第13-14页 |
| 1.1.4 根瘤菌分类 | 第14-15页 |
| 1.2 微生物硫代谢 | 第15-22页 |
| 1.2.1 硫元素 | 第15页 |
| 1.2.2 微生物硫代谢研究进展 | 第15-16页 |
| 1.2.3 根瘤菌中硫代谢研究进展 | 第16-20页 |
| 1.2.4 硫同化作用 | 第20-21页 |
| 1.2.5 ATP硫化酶 | 第21-22页 |
| 1.3 课题的研究目的 | 第22-23页 |
| 第二章 材料与方法 | 第23-44页 |
| 2.1 实验材料和试剂 | 第23-30页 |
| 2.1.1 供试菌株、质粒与豆科植株 | 第23-25页 |
| 2.1.2 本研究所用到的引物 | 第25-26页 |
| 2.1.3 抗生素 | 第26页 |
| 2.1.4 培养基 | 第26-29页 |
| 2.1.5 常用试剂、溶液与缓冲液 | 第29-30页 |
| 2.2 常规实验操作 | 第30页 |
| 2.2.1 培养条件 | 第30页 |
| 2.2.2 菌种保存 | 第30页 |
| 2.3 分子操作技术 | 第30-37页 |
| 2.3.1 根瘤菌总DNA提取 | 第30-31页 |
| 2.3.2 质粒提取 | 第31-32页 |
| 2.3.3 琼脂糖凝胶电泳 | 第32页 |
| 2.3.4 DNA聚合酶链式反应 | 第32-34页 |
| 2.3.5 PCR产物纯化 | 第34页 |
| 2.3.6 DNA片段分离和回收 | 第34-35页 |
| 2.3.7 DNA酶切 | 第35页 |
| 2.3.8 核酸片段连接 | 第35-36页 |
| 2.3.9 转化 | 第36-37页 |
| 2.4 缺失突变体构建原理 | 第37-38页 |
| 2.5 功能反式互补菌株构建 | 第38-39页 |
| 2.6 三亲本结合法构建缺失突变体 | 第39-40页 |
| 2.7 硫源分析 | 第40-41页 |
| 2.8 植株实验 | 第41-42页 |
| 2.9 固氮酶活的测定 | 第42-44页 |
| 第三章 结果与分析 | 第44-72页 |
| 3.1 cysDN的克隆与序列分析 | 第44-45页 |
| 3.2 S.fredii WGF03中cysDN基因的研究 | 第45-52页 |
| 3.2.1 cysDN基因缺失突变体的构建 | 第45-48页 |
| 3.2.2 突变体△cysDN/WGF03功能互补菌株的构建 | 第48-50页 |
| 3.2.3 缺失突变体△cysDN/WGF03硫源利用情况分析 | 第50-52页 |
| 3.3 S.fredii HN01中cysDN基因的研究 | 第52-59页 |
| 3.3.1 cysDN基因缺失突变体的构建 | 第52-54页 |
| 3.3.2 突变体△cysDN/HN01功能互补菌株的构建 | 第54-55页 |
| 3.3.3 缺失突变体△cysDN/HN01硫源利用情况分析 | 第55-57页 |
| 3.3.4 缺失突变体△cysDN/HN01与豆科植株共生结瘤实验 | 第57-59页 |
| 3.4 S meliloti 14500中cysDN基因的研究 | 第59-65页 |
| 3.4.1 cysDN基因缺失突变体的构建 | 第59-61页 |
| 3.4.2 突变体△cysDN/14500功能互补菌株的构建 | 第61-62页 |
| 3.4.3 缺失突变体△cysDN/14500硫源利用情况分析 | 第62-64页 |
| 3.4.4 缺失突变体△cysDN/14500与豆科植株共生结瘤实验 | 第64-65页 |
| 3.5 B.japonicum 15606中cysDN基因的研究 | 第65-72页 |
| 3.5.1 cysD基因整合突变体(极性突变体)的构建 | 第65-68页 |
| 3.5.2 整合突变体cysD_(Rm)/15606硫源利用情况分析 | 第68-69页 |
| 3.5.3 整合突变体cysD_(Rm)/15606与豆科植株共生结瘤实验 | 第69-72页 |
| 第四章 总结与讨论 | 第72-76页 |
| 4.1 总结 | 第72页 |
| 4.2 讨论 | 第72-75页 |
| 4.2.1 突变体对硫同化代谢影响的研究 | 第73-75页 |
| 4.2.2 突变体对共生结瘤效率的分析 | 第75页 |
| 4.3 展望 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 附录 | 第85-91页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第91页 |
