| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 文献综述 | 第10-19页 |
| 第一章 α-甘露糖苷酶研究进展及酶类定点突变研究 | 第10-19页 |
| 1.1 α-甘露糖苷酶研究背景 | 第10-11页 |
| 1.2 α-甘露糖苷酶贮积症 | 第11-12页 |
| 1.3 α-甘露糖苷酶结构分析 | 第12-14页 |
| 1.3.1 甘露糖苷酶的结构作用 | 第12-13页 |
| 1.3.2 甘露糖苷酶结晶结构的研究 | 第13-14页 |
| 1.3.3 影响甘露糖苷酶活性的位点分析 | 第14页 |
| 1.4 α-甘露糖苷酶的表达研究 | 第14-15页 |
| 1.5 α-甘露糖苷酶活性检测 | 第15-16页 |
| 1.5.1 α-甘露糖苷酶的抑制动力学 | 第15页 |
| 1.5.2 α-甘露糖苷酶活性检测方法及原理 | 第15页 |
| 1.5.3 苦马豆素抑制α-甘露糖苷酶的剂量效应关系 | 第15-16页 |
| 1.6 酶类定点突变研究 | 第16-19页 |
| 1.6.1 定点突变 | 第16页 |
| 1.6.2 重叠延伸PCR技术 | 第16-17页 |
| 1.6.3 不同酶类的定点突变研究 | 第17-19页 |
| 试验研究 | 第19-38页 |
| 第二章 山羊溶酶体AMA基因的定点突变及克隆质粒构建 | 第19-26页 |
| 2.1 材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 主要仪器 | 第19-20页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第20页 |
| 2.1.3 试验样品 | 第20页 |
| 2.1.4 试验菌株及表达载体 | 第20页 |
| 2.2 方法 | 第20-23页 |
| 2.2.1 重叠延伸PCR(overlap extension PCR)引物设计 | 第20-21页 |
| 2.2.2 重叠延伸PCR定点突变 | 第21-22页 |
| 2.2.3 目的基因克隆质粒的构建 | 第22页 |
| 2.2.4 阳性克隆质粒的测序 | 第22-23页 |
| 2.3 结果 | 第23-25页 |
| 2.3.1 chLAM重叠延伸PCR结果 | 第23页 |
| 2.3.2 野生型和突变型chLAM基因的克隆及测序 | 第23-25页 |
| 2.4 讨论 | 第25页 |
| 2.5 小结 | 第25-26页 |
| 第三章 山羊溶酶体AMA的重组表达质粒构建及酵母表达 | 第26-38页 |
| 3.1 材料 | 第26-28页 |
| 3.1.1 主要仪器 | 第26页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第26页 |
| 3.1.3 试验菌株和载体 | 第26页 |
| 3.1.4 培养基 | 第26-28页 |
| 3.2 方法 | 第28-31页 |
| 3.2.1 目的基因的扩增 | 第28页 |
| 3.2.2 重组毕赤酵母表达质粒的制备及鉴定 | 第28-29页 |
| 3.2.3 重组毕赤酵母表达质粒的电转化 | 第29页 |
| 3.2.4 重组表达菌株的筛选及诱导表达 | 第29-30页 |
| 3.2.5 酵母诱导表达产物的检测及分离纯化 | 第30页 |
| 3.2.6 酵母表达纯化产物的活性测定及对SW敏感性鉴定 | 第30-31页 |
| 3.2.7 重组野生型和突变型chLAM蛋白的特性分析 | 第31页 |
| 3.3 结果 | 第31-35页 |
| 3.3.1 阳性正向连接重组表达质粒的筛选鉴定 | 第31-32页 |
| 3.3.2 重组酵母菌株基因组PCR | 第32-33页 |
| 3.3.3 表达产物的SDS-PAGE检测及纯化 | 第33-34页 |
| 3.3.4 酵母表达产物的活性检测及其对SW敏感性的检测 | 第34页 |
| 3.3.5 重组野生型及突变型chLAM蛋白的特性分析 | 第34-35页 |
| 3.4 讨论 | 第35-37页 |
| 3.5 小结 | 第37-38页 |
| 结论 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 作者简介 | 第45页 |
