摘要 | 第4-5页 |
ABSTRACT | 第5页 |
英文缩略词表 | 第8-9页 |
第1章 前言 | 第9-14页 |
1.1 胶质母细胞瘤 | 第9页 |
1.2 肿瘤微环境和 HIF-1 | 第9-11页 |
1.3 线粒体 | 第11-12页 |
1.4 活性氧产物(ROS) | 第12-13页 |
1.5 研究目的与意义 | 第13-14页 |
第2章 材料与方法 | 第14-29页 |
2.1 仪器与试剂 | 第14-16页 |
2.2 实验材料 | 第16页 |
2.3 实验方法 | 第16-29页 |
2.3.1 U251 细胞培养 | 第16-17页 |
2.3.2 U251 细胞划痕实验 | 第17页 |
2.3.3 U251 细胞迁移实验 | 第17-18页 |
2.3.4 RT-PCR 检查 U251 低氧条件下 Drp1 的转录水平 | 第18-21页 |
2.3.5 Western Blot 检测 U251Drp1 的蛋白表达水平 | 第21-23页 |
2.3.6 Western Blot 检测 U251 加 HIF-1 阻滞剂后 Drp1 的蛋白表达水平 | 第23页 |
2.3.7 U251 细胞中 ROS 的检测 | 第23页 |
2.3.8 线粒体形态观察 | 第23-24页 |
2.3.9 U251 稳定细胞系的建立 | 第24-28页 |
2.3.10 MTT 法检测三种稳定 U251 细胞系的细胞增殖 | 第28页 |
2.3.11 三种稳定细胞系细胞划痕实验和 Transwell 细胞迁移实验 | 第28-29页 |
第3章 结果与分析 | 第29-40页 |
3.1 U251 细胞 Drp1 的转录表达水平 | 第29页 |
3.2 Western Blot 检测 Drp1 蛋白表达水平 | 第29-31页 |
3.2.1 Western Blot 检测低氧条件下 Drp1 蛋白表达水平 | 第29-30页 |
3.2.2 Western Blot 检测低氧条件下加入 HIF1α阻滞剂后 Drp1 蛋白表达水平 | 第30-31页 |
3.3 线粒体染色 | 第31页 |
3.4 不同条件下 U251 细胞迁移实验 | 第31-32页 |
3.5 U251 细胞 Transwell 实验结果 | 第32-33页 |
3.6 建立 GFP,GFP-DRP1 和 GFP-DRP1-K38A 三种稳定表达细胞系 | 第33-36页 |
3.6.1 筛选 U251 培养 12 天的最适合细胞接种浓度 | 第34页 |
3.6.2 U251 最低 G418 致死浓度的筛选 | 第34-35页 |
3.6.3 稳定细胞系的鉴定 | 第35页 |
3.6.4 U251 转染后,Western Blot 验证转染情况 | 第35-36页 |
3.7 三种 U251 稳定表达细胞系的细胞迁移实验 | 第36-38页 |
3.7.1 MTT 法检测稳定表达细胞系的增殖情况 | 第36-37页 |
3.7.2 三种稳定表达细胞低氧划痕实验 | 第37页 |
3.7.3 三种稳定表达细胞低氧 Transwell 实验 | 第37-38页 |
3.8 U251 胶质母细胞线粒体 ROS 的水平 | 第38-40页 |
第4章 讨论 | 第40-43页 |
第5章 结论 | 第43-44页 |
致谢 | 第44-45页 |
参考文献 | 第45-48页 |
攻读学位期间发表论文 | 第48-49页 |
综述 | 第49-58页 |
参考文献 | 第55-58页 |