| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 背景知识 | 第10-24页 |
| 1.1 单分子生物物理技术 | 第10-15页 |
| 1.1.1 单分子荧光成像 | 第10-11页 |
| 1.1.2 单分子力学操纵 | 第11-12页 |
| 1.1.3 单分子荧光成像和力学操纵的结合 | 第12-15页 |
| 1.2 Pif1解旋酶 | 第15-18页 |
| 1.2.1 解旋酶简介 | 第15-17页 |
| 1.2.2 Pif1解旋酶 | 第17-18页 |
| 1.3 RPA | 第18-19页 |
| 1.4 shelterin | 第19-24页 |
| 第二章 单分子荧光共振能量转移技术 | 第24-34页 |
| 2.1 原理 | 第24-26页 |
| 2.2 DNA荧光标记 | 第26页 |
| 2.3 蛋白质荧光标记 | 第26-28页 |
| 2.4 单分子实验 | 第28-32页 |
| 2.4.1 玻片表面处理:清洗、硅烷化和PEG处理 | 第28页 |
| 2.4.2 制作实验样品小槽 | 第28-29页 |
| 2.4.3 单分子连接 | 第29-30页 |
| 2.4.4 全内反射荧光显微镜数据收集 | 第30-32页 |
| 2.5 数据分析 | 第32-34页 |
| 2.5.1 荧光珠子映像两屏 | 第32-33页 |
| 2.5.2 FRET轨迹 | 第33页 |
| 2.5.3 数据统计 | 第33-34页 |
| 第三章 纳米张力器——超高精度荧光共振能量转移技术 | 第34-48页 |
| 3.1 前言 | 第34-36页 |
| 3.2 材料和方法 | 第36-41页 |
| 3.2.1 材料 | 第36-38页 |
| 反应溶液 | 第36页 |
| DNA底物 | 第36-38页 |
| 3.2.2 方法 | 第38-41页 |
| 3.3 结果与分析 | 第41-47页 |
| 3.3.1 纳米张力器实现0.5bp分辨率 | 第41-44页 |
| 3.3.2 纳米张力器测得Pif1解旋酶1bp步进解旋台阶 | 第44-47页 |
| 3.4 讨论 | 第47-48页 |
| 第四章 单分子研究Pif1解旋酶机理 | 第48-68页 |
| 4.1 前言 | 第48-49页 |
| 4.2 材料与方法 | 第49-52页 |
| 4.2.1 材料 | 第49-51页 |
| 反应溶液 | 第49页 |
| DNA底物 | 第49-50页 |
| 蛋白质表达、纯化和标记 | 第50-51页 |
| 4.2.2 方法 | 第51-52页 |
| 数据采集 | 第51页 |
| 数据分析 | 第51-52页 |
| 4.3 结果与分析 | 第52-65页 |
| 4.3.1 Pif1是受力调控的解旋酶 | 第52-62页 |
| Pif1单体解旋dsDNA | 第52-54页 |
| Pif1低持续解旋能力 | 第54-58页 |
| Pif1解旋速度近似于在单链上移位速率 | 第58-59页 |
| Pif1持续解旋能力和解旋速度受力调控 | 第59-62页 |
| 4.3.2 Pif1解旋双链DNA步进模型 | 第62-65页 |
| Pif1解旋酶均一和不均一的台阶信号 | 第62-63页 |
| Pif1解旋酶释放核苷酸链与打开碱基对异步的解旋模型 | 第63-65页 |
| 4.4 讨论 | 第65-68页 |
| 第五章 荧光共振能量转移研究shelterin对抗RPA机制 | 第68-86页 |
| 5.1 前言 | 第68-69页 |
| 5.2 材料与方法 | 第69-75页 |
| 5.2.1 材料 | 第69-72页 |
| 反应溶液 | 第69页 |
| DNA底物 | 第69-71页 |
| 蛋白质表达、纯化和组装 | 第71-72页 |
| 5.2.2 方法 | 第72-75页 |
| smFRET实验数据获得 | 第72-74页 |
| smFRET数据分析 | 第74-75页 |
| 5.3 结果和分析 | 第75-84页 |
| 5.3.1 GQ、RPA、POT1和shelterin 峰值 | 第75-77页 |
| GQ结构 | 第75-76页 |
| RPA、POT1和shelterin峰值 | 第76-77页 |
| 5.3.2 RPA、 POT1、TRF1-shelterin、TRF2-shelterin解开GQ能力 | 第77-80页 |
| 5.3.3 RPA高浓度下稳定结合GQ | 第80-81页 |
| 5.3.4 shelterin保护GQ抵抗RPA | 第81-84页 |
| TRF1-shelterin、TRF2-shelterin保护GQ抵抗RPA | 第81-82页 |
| shelterin无栓系作用增强对抗RPA能力3-5倍 | 第82-84页 |
| 5.4 讨论 | 第84-86页 |
| 第六章 结论 | 第86-90页 |
| 6.1 纳米张力器超高精度荧光共振能量转移技术 | 第86-87页 |
| 6.2 Pif1解旋酶机制研究 | 第87-88页 |
| 6.3 Shelterin对抗RPA机制研究 | 第88-90页 |
| 参考文献 | 第90-110页 |
| 个人简历及发表文章目录 | 第110-112页 |
| 致谢 | 第112-114页 |
