| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 第一部分 绪论 | 第10-22页 |
| 1 白垩病发生概况 | 第10页 |
| 2 白垩病流行病学 | 第10-11页 |
| 3 白垩病的鉴定 | 第11-12页 |
| 3.1 传统鉴定方法 | 第11页 |
| 3.2 分子检测鉴定 | 第11-12页 |
| 3.3 白垩病的治理 | 第12页 |
| 4 球囊菌 | 第12-15页 |
| 4.1 A.apis的生态学特征 | 第12-13页 |
| 4.2 A.apis侵染的蜜蜂病理学研究 | 第13-14页 |
| 4.3 A.apis孢子剂量与侵染力的关系 | 第14-15页 |
| 5 蜜蜂的免疫 | 第15-19页 |
| 5.1 细胞免疫 | 第15页 |
| 5.2 体液免疫 | 第15-19页 |
| 5.2.1 抗菌肽与信号通路 | 第16-17页 |
| 5.2.2 酚氧化酶原级联系统 | 第17页 |
| 5.2.3 蜜蜂酚氧化酶结构特征及表达 | 第17-18页 |
| 5.2.4 蜜蜂酚氧化酶活性的测定 | 第18-19页 |
| 6 荧光定量PCR技术 | 第19-20页 |
| 7 本试验目的和意义 | 第20-22页 |
| 第二部分 室内人工饲养意大利蜜蜂幼虫及接种球囊菌孢子的研究 | 第22-31页 |
| 1 试验材料与方法 | 第22-24页 |
| 1.1 试验材料 | 第22页 |
| 1.2 试验方法 | 第22-24页 |
| 1.2.1 A.apis的分离与收集 | 第22-23页 |
| 1.2.2 室内人工饲养意大利蜜蜂幼虫 | 第23页 |
| 1.2.3 A.apis孢子悬浮液的制备 | 第23-24页 |
| 1.2.4 接种A. apis孢子 | 第24页 |
| 1.2.5 数据统计与分析 | 第24页 |
| 2 结果与分析 | 第24-29页 |
| 2.1 纯化菌株及产孢菌落形态 | 第24-25页 |
| 2.2 室内人工饲养意大利蜜蜂幼虫并对其接种A.apis孢子 | 第25-27页 |
| 2.3 室内人工饲养意大利蜜蜂幼虫及对5日龄幼虫接种A.apis孢子后的累计死亡情况统计 | 第27-28页 |
| 2.4 A.apis孢子接种剂量与蜜蜂白垩病感染率的关系 | 第28-29页 |
| 3 小结 | 第29-31页 |
| 第三部分 血淋巴中的免疫反应 | 第31-39页 |
| 1 试验材料与方法 | 第31-34页 |
| 1.1 试验材料 | 第31-32页 |
| 1.2 试验方法 | 第32-34页 |
| 1.2.1 A.apis的分离与收集 | 第32页 |
| 1.2.2 室内人工饲养意大利蜜蜂幼虫 | 第32页 |
| 1.2.3 A.apis孢子悬浮液的制备 | 第32页 |
| 1.2.4 接种A.apis孢子 | 第32页 |
| 1.2.5 血淋巴的抽取 | 第32-33页 |
| 1.2.6 血淋巴内细胞形态观察 | 第33页 |
| 1.2.7 血细胞总数计数(Total Hemocyte Counts,THC) | 第33页 |
| 1.2.8 黑化反应 | 第33-34页 |
| 1.2.9 数据统计方法 | 第34页 |
| 2 结果与分析 | 第34-37页 |
| 2.1 显微镜检查中肠孢子 | 第34页 |
| 2.2 血淋巴内细胞形态观察 | 第34-35页 |
| 2.3 蜜蜂幼虫体内血细胞总数测定结果 | 第35-36页 |
| 2.4 接种A.apis孢子对黑化反应的影响 | 第36-37页 |
| 3 小结 | 第37-39页 |
| 第四部分 球囊菌侵染对意大利蜜蜂酚氧化酶原基因表达的影响 | 第39-49页 |
| 1 试验材料和方法 | 第39-41页 |
| 1.1 材料 | 第39-40页 |
| 1.1.1 蜜蜂与菌种 | 第39页 |
| 1.1.2 试剂 | 第39-40页 |
| 1.1.3 溶液配制 | 第40页 |
| 1.2 仪器 | 第40-41页 |
| 2 试验方法 | 第41-44页 |
| 2.1 室内人工饲养意大利蜜蜂幼虫及接种A.apis孢子技术 | 第41页 |
| 2.2 样本的选取 | 第41页 |
| 2.3 总RNA的提取 | 第41-42页 |
| 2.4 cDNA第一链的合成 | 第42-43页 |
| 2.5 PCR检测 | 第43页 |
| 2.5.1 PCR反应体系 | 第43页 |
| 2.5.2 PCR反应条件 | 第43页 |
| 2.5.3 检测 | 第43页 |
| 2.6 qPCR定量 | 第43-44页 |
| 2.6.1 qPCR反应 | 第43-44页 |
| 2.6.3 扩增效率的检测 | 第44页 |
| 2.6.4 qPCR定量 | 第44页 |
| 2.7 数据处理及统计分析 | 第44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-48页 |
| 3.1 RT-PCR结果 | 第44-45页 |
| 3.2 扩增效率一致性分析 | 第45-46页 |
| 3.3 qPCR产物特异性分析 | 第46-47页 |
| 3.4 意大利蜜蜂proPO基因mRNA水平的相对定量分析 | 第47-48页 |
| 4 小结 | 第48-49页 |
| 第五部分 讨论与总结 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
