| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 符号说明 | 第12-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-24页 |
| 一. 概述 | 第14页 |
| 二. 昆虫蜕皮变态的分子机制 | 第14-15页 |
| 三. 蜕皮激素信号转导途径 | 第15-18页 |
| 1. 蜕皮激素的核信号途径 | 第15-17页 |
| 1.1 蜕皮激素核受体Ecdysone receptor(EcR) | 第15-16页 |
| 1.2 超气门蛋白Ultraspiracle(USP) | 第16页 |
| 1.3 变态起始因子Broad(Br) | 第16页 |
| 1.4 Hormone Receptor 3(HR3) | 第16-17页 |
| 2. 蜕皮激素非基因组信号途径 | 第17-18页 |
| 四. 甾醇类激素激活的G蛋白信号转导途径 | 第18-24页 |
| 1. G蛋白(Guanine nucleotide-binding proteins, G proteins)概述 | 第18-19页 |
| 2. Gα亚基(G protein alpha subunit)分类,分布及信号传递模式 | 第19-21页 |
| 3. Gα亚基功能 | 第21-22页 |
| 4. G蛋白与类固醇激素 | 第22-24页 |
| 第二章 Gαq基因在棉铃虫蜕皮变态中的功能 | 第24-52页 |
| 一. 引言 | 第24页 |
| 二. 实验材料与方法 | 第24-36页 |
| 1. 实验材料 | 第24-26页 |
| 1.1 实验动物 | 第24-25页 |
| 1.2 实验试剂 | 第25页 |
| 1.3 实验仪器 | 第25-26页 |
| 2. 实验方法 | 第26-36页 |
| 2.1 虫体总RNA提取 | 第26页 |
| 2.2 反转录cDNA | 第26-27页 |
| 2.3 基因克隆及序列分析 | 第27页 |
| 2.4 原核表达及抗体制备 | 第27-31页 |
| 2.4.1 重组表达载体构建 | 第27-29页 |
| 2.4.1.1 表达序列的扩增 | 第27-28页 |
| 2.4.1.2 酶切 | 第28页 |
| 2.4.1.3 转化 | 第28页 |
| 2.4.1.4 筛选阳性克隆 | 第28页 |
| 2.4.1.5 重组质粒酶切验证 | 第28-29页 |
| 2.4.1.6 重组质粒转化表达菌株Rosetta(DE3) | 第29页 |
| 2.4.2 试表达 | 第29页 |
| 2.4.3 大规模表达 | 第29-30页 |
| 2.4.4 纯化重组蛋白 | 第30页 |
| 2.4.5 重组蛋白His变性柱亲和纯化 | 第30页 |
| 2.4.6 多克隆抗体制备 | 第30-31页 |
| 2.5 Western blot | 第31-32页 |
| 2.5.1 虫体蛋白质提取 | 第31页 |
| 2.5.2 细胞蛋白质提取 | 第31页 |
| 2.5.3 免疫印迹 | 第31-32页 |
| 2.6 qRT-PCR | 第32页 |
| 2.7 虫体激素刺激 | 第32页 |
| 2.8 干扰实验 | 第32-34页 |
| 2.8.1 虫体干扰注射双链RNA | 第32-33页 |
| 2.8.2 虫体干扰加激素 | 第33页 |
| 2.8.3 细胞系干扰 | 第33-34页 |
| 2.8.4 细胞总RNA提取 | 第34页 |
| 2.9 免疫细胞化学 | 第34页 |
| 2.10 PKC磷酸化分析 | 第34-35页 |
| 2.11 钙离子测定 | 第35页 |
| 2.12 干扰基因检测CDK10,USP1磷酸化水平变化 | 第35-36页 |
| 三 实验结果 | 第36-49页 |
| 1. Gαq序列基因克隆及序列分析 | 第36-39页 |
| 2. Gαq重组表达与抗体制备 | 第39页 |
| 3. Gαq在棉铃虫变态期高表达 | 第39-41页 |
| 4. 干扰Gαq影响棉铃虫的变态 | 第41-42页 |
| 5. 干扰Gαq抑制20E信号通路的基因转录 | 第42-43页 |
| 6. Gαq蛋白能在亚细胞水平上响应20E,向细胞膜迁移 | 第43-45页 |
| 7. Gαq能调节20E诱导下的棉铃虫表皮细胞钙离子水平 | 第45-46页 |
| 8. Gαq能调控20E诱导下的CDK10,USP1的磷酸化 | 第46-47页 |
| 9. 在20E的刺激下,Gαq蛋白能够被PKC磷酸化 | 第47-49页 |
| 四. 讨论 | 第49-51页 |
| 1. Gαq参与到20E诱导的胞内钙离子增加 | 第49页 |
| 2. 20E通过Gαq调控由PKC介导的CDK10和USP1的磷酸化 | 第49-50页 |
| 3. 20E通过Gαq调控基因的表达和昆虫变态行为的发生 | 第50-51页 |
| 五. 结论 | 第51-52页 |
| 论文创新点总结 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第63页 |
