| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一章 绪论 | 第10-26页 |
| 1.1 古菌概述 | 第10-12页 |
| 1.1.1 古菌的发现 | 第10页 |
| 1.1.2 古菌的分类 | 第10-11页 |
| 1.1.3 古菌基本特征 | 第11-12页 |
| 1.2 硫化叶菌概述 | 第12-14页 |
| 1.2.1 硫化叶菌基本特征 | 第12页 |
| 1.2.2 硫化叶菌遗传操作系统 | 第12-14页 |
| 1.3 DNA损伤与修复 | 第14-16页 |
| 1.3.1 DNA损伤 | 第14-15页 |
| 1.3.2 DNA损伤修复 | 第15-16页 |
| 1.4 HJ解离酶 | 第16-23页 |
| 1.4.1 原核生物解离酶 | 第16-18页 |
| 1.4.2 真核生物解离酶 | 第18-22页 |
| 1.4.3 古菌解离酶 | 第22-23页 |
| 1.5 Hje、Hjc体内功能前期研究进展 | 第23-25页 |
| 1.6 本文研究目的及意义 | 第25-26页 |
| 第二章 损伤剂HU及MMS的热稳定性检测及Hje染色体回补菌株的遗传分析 | 第26-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第26页 |
| 2.1.1 菌株及培养基 | 第26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-29页 |
| 2.2.1 基因组回补质粒pK-Hje-C-His、pK-Hje及pK-Hje~(E52A/K54A)-C-His、pK-Hje~(E52A/K54A)的构建 | 第26-27页 |
| 2.2.2 基因组回补质粒的线性化处理及电转化 | 第27-28页 |
| 2.2.3 基因组回补Hje、Hje-C-His、Hje~(E52A/K54A)、Hje~(E52A/K54A)-C-His转化子的筛选 | 第28页 |
| 2.2.4 DNA损伤剂HU、MMS热稳定性检测 | 第28-29页 |
| 2.2.5 DNA损伤剂敏感性实验 | 第29页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第29-38页 |
| 2.3.1 基因组回补菌株的筛选 | 第29-33页 |
| 2.3.2 DNA损伤剂HU、MMS在高温环境下的稳定性研究 | 第33-35页 |
| 2.3.3 基因组回补菌株的DNA损伤剂敏感性检测 | 第35-37页 |
| 2.3.4 Hje-C-His及Hje蛋白体外活性检测 | 第37-38页 |
| 2.4 总结与讨论 | 第38-39页 |
| 第三章 Hje过表达菌株的表型分析 | 第39-55页 |
| 3.1 实验方法 | 第39-41页 |
| 3.1.1 过表达no His蛋白的质粒pSeSD-NPHje、pSeSD-Hje及pSeSD-Hje~(E52A/K54A)的构建 | 第39页 |
| 3.1.2 DNA损伤剂敏感性实验 | 第39-40页 |
| 3.1.3 生长曲线测定 | 第40页 |
| 3.1.4 目的蛋白的诱导表达 | 第40页 |
| 3.1.5 目的蛋白的纯化 | 第40页 |
| 3.1.6 SDS-PAGE及Western blotting分析目的蛋白 | 第40-41页 |
| 3.2 结果与讨论 | 第41-53页 |
| 3.2.1 Hje-C-His蛋白在体内稳定表达 | 第41-42页 |
| 3.2.2 Hje-C-His超表达影响菌株的生长 | 第42-45页 |
| 3.2.3 Western检测Hje-C-His不同水平表达量 | 第45-47页 |
| 3.2.4 过表达无标签Hje蛋白的表型分析 | 第47-50页 |
| 3.2.5 质粒过表达Hje回补菌株的表型分析 | 第50-53页 |
| 3.3 总结与讨论 | 第53-55页 |
| 第四章 hje、hjc、xpf基因双缺失突变体的构建及遗传关系初步分析 | 第55-66页 |
| 4.1 实验材料 | 第55页 |
| 4.2 实验方法 | 第55-58页 |
| 4.2.1 敲除质粒pK-hjc的构建 | 第55-56页 |
| 4.2.2 敲除质粒pK-hjc、pK-xpf的线性化及电转化 | 第56页 |
| 4.2.3 整合型菌株的筛选 | 第56-57页 |
| 4.2.4 缺失突变体的筛选 | 第57-58页 |
| 4.3 实验结果 | 第58-65页 |
| 4.3.1 敲除质粒pK-hjc的构建 | 第58页 |
| 4.3.2 整合型菌株的筛选与鉴定 | 第58-63页 |
| 4.3.3 双缺失突变体的反选与鉴定 | 第63-65页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第65-66页 |
| 第五章 总结与展望 | 第66-69页 |
| 附录 | 第69-78页 |
| 附录一 药品和试剂 | 第69-70页 |
| 附录二 本文所用的PCR引物、构建的质粒及菌株 | 第70-74页 |
| 附录三 S.islandicus E233S感受态细胞制备、电转化及菌株培养 | 第74-76页 |
| 附录四 本文所涉及的培养基 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第85页 |
