| 英文缩写表 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| Summary | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-25页 |
| 1 家畜精液品质检测研究进展 | 第13-18页 |
| 1.1 精液直观检查 | 第13-14页 |
| 1.2 精子活力 | 第14页 |
| 1.3 精子活率 | 第14-15页 |
| 1.4 精子密度 | 第15页 |
| 1.5 精子畸形率 | 第15页 |
| 1.6 精子质膜完整性 | 第15-17页 |
| 1.6.1 常规染色检测 | 第16页 |
| 1.6.2 荧光染色检测 | 第16-17页 |
| 1.6.3 低渗肿胀试验(HOST) | 第17页 |
| 1.7 精子顶体完整性 | 第17-18页 |
| 1.7.1 透射电镜法 | 第17-18页 |
| 1.7.2 染色法 | 第18页 |
| 2 精液中酶类研究进展 | 第18-20页 |
| 2.1 乳酸脱氢酶(LDH) | 第18-19页 |
| 2.2 酸性磷酸酶(ACP) | 第19页 |
| 2.3 超氧化物歧化酶(SOD) | 第19-20页 |
| 2.4 谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX) | 第20页 |
| 3 热应激蛋白的研究进展 | 第20-24页 |
| 3.1 HSP70家族的研究进展 | 第20-22页 |
| 3.2 HSP90家族的研究进展 | 第22-23页 |
| 3.3 其他HSPs家族的研究进展 | 第23-24页 |
| 4 试验目的与意义 | 第24-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-31页 |
| 1 试验材料 | 第25页 |
| 1.1 样本采集 | 第25页 |
| 1.2 主要仪器设备 | 第25页 |
| 1.3 主要试剂 | 第25页 |
| 1.4 主要试剂的配制方法 | 第25页 |
| 2 试验方法 | 第25-31页 |
| 2.1 牦牛精液样品处理 | 第25-26页 |
| 2.1.1 稀释液配制 | 第25页 |
| 2.1.2 鲜精采集 | 第25页 |
| 2.1.3 冻精制备及解冻 | 第25-26页 |
| 2.1.4 精子纯化 | 第26页 |
| 2.2 牦牛精子总RNA提取方法的比较 | 第26-27页 |
| 2.2.1 牦牛精子总RNA提取 | 第26页 |
| 2.2.2 牦牛精子总RNA质量检测 | 第26-27页 |
| 2.3 冷冻前后牦牛精子常规检测及酶活测定 | 第27-29页 |
| 2.3.1 牦牛精子活力检测 | 第28页 |
| 2.3.2 牦牛精子密度检测 | 第28页 |
| 2.3.3 牦牛精子顶体完整性和畸形率检测 | 第28页 |
| 2.3.4 牦牛精子质膜完整性检测 | 第28页 |
| 2.3.5 牦牛精子扫描电镜检测 | 第28-29页 |
| 2.3.6 牦牛精子酶活测定 | 第29页 |
| 2.4 牦牛精子冻融后HSP70和HSP90表达差异检测 | 第29-30页 |
| 2.4.1 qRT-PCR | 第29页 |
| 2.4.2 免疫荧光 | 第29-30页 |
| 2.4.3 Westernblot | 第30页 |
| 2.5 数据分析方法 | 第30-31页 |
| 第三章 结果与分析 | 第31-46页 |
| 1 精子纯化效果 | 第31页 |
| 2 牦牛精子总RNA提取方法的比较 | 第31-34页 |
| 2.1 精子总RNA浓度和纯度检测 | 第31-32页 |
| 2.2 牦牛冻精总RNA质量检测 | 第32-34页 |
| 2.2.1 精子总RNA完整性及基因组DNA去除效果检测 | 第32-33页 |
| 2.2.2 精子总RNA中体细胞去除效果检测 | 第33-34页 |
| 3 冷冻前后牦牛精子品质检测 | 第34-37页 |
| 3.1 精子常规指标检测 | 第34-36页 |
| 3.2 牦牛精子冷冻前后扫描电镜检测 | 第36-37页 |
| 3.3 冷冻前后牦牛精子酶活检测 | 第37页 |
| 4 牦牛鲜精与冻精HSP70表达差异的比较 | 第37-41页 |
| 4.1 牦牛鲜精与冻精总RNA完整性检测 | 第37-38页 |
| 4.2 牦牛精子冷冻前后HSP70基因的表达 | 第38-39页 |
| 4.3 牦牛精子冷冻前后HSP70蛋白的表达 | 第39页 |
| 4.4 牦牛精子冷冻前后HSP70蛋白的表达定位 | 第39-41页 |
| 5 牦牛鲜精与冻精HSP90表达差异的比较 | 第41-44页 |
| 5.1 牦牛鲜精与冻精总RNA完整性检测 | 第41页 |
| 5.2 牦牛精子冷冻前后HSP90基因的表达 | 第41-42页 |
| 5.3 牦牛精子冷冻前后HSP90蛋白的表达 | 第42-43页 |
| 5.4 牦牛精子冷冻前后HSP90蛋白的表达定位 | 第43-44页 |
| 6 HSP70mRNA表达量与牦牛精子品质的关系 | 第44页 |
| 7 HSP90mRNA表达量与牦牛精子品质的关系 | 第44-46页 |
| 第四章 讨论 | 第46-52页 |
| 1 牦牛精子总RNA提取方法结果分析 | 第46-47页 |
| 1.1 牦牛精子纯化结果分析 | 第46页 |
| 1.2 牦牛精子总RNA浓度与纯度检测结果分析 | 第46-47页 |
| 1.3 牦牛精子总RNA完整性与DNA污染检测结果分析 | 第47页 |
| 2 牦牛精子冷冻前后的品质评估结果分析 | 第47-48页 |
| 2.1 牦牛精子冷冻前后的常规检测结果分析 | 第47-48页 |
| 2.2 牦牛精子冷冻前后酶活力检测结果分析 | 第48页 |
| 3 鲜精和冻精HSP70、HSP90表达差异研究 | 第48-50页 |
| 3.1 鲜精和冻精HSP70、HSP90表达量 | 第48-49页 |
| 3.2 鲜精和冻精HSP70、HSP90表达定位 | 第49-50页 |
| 4 牦牛HSP70、HSP90基因表达量与精子品质相关性结果分析 | 第50-52页 |
| 第五章 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-66页 |
| 附录 | 第66-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 作者简介 | 第72-73页 |
| 导师简介 | 第73-74页 |
