| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 综述 | 第13-24页 |
| 1.1 有机磷农药概述 | 第13页 |
| 1.2 有机磷农药残留检测技术概述 | 第13-15页 |
| 1.2.1 仪器分析法 | 第13-14页 |
| 1.2.2 酶抑制法 | 第14页 |
| 1.2.3 生物传感器法 | 第14页 |
| 1.2.4 免疫分析法 | 第14-15页 |
| 1.3 抗体研究的发展历程 | 第15-18页 |
| 1.3.1 多克隆抗体研究 | 第15页 |
| 1.3.2 单克隆抗体 | 第15-16页 |
| 1.3.3 基因工程抗体 | 第16-18页 |
| 1.3.3.1 单链抗体 | 第16-18页 |
| 1.3.3.2 双特异性抗体 | 第18页 |
| 1.4 单克隆抗体的应用 | 第18-20页 |
| 1.4.1 单克隆抗体在医药方面的应用 | 第18-19页 |
| 1.4.1.1 疾病诊断 | 第18-19页 |
| 1.4.1.2 疾病的治疗 | 第19页 |
| 1.4.1.3 单抗-药物偶联物 | 第19页 |
| 1.4.2 单克隆抗体在农业以及食品安全方面的应用 | 第19-20页 |
| 1.5 单链抗体的应用 | 第20-21页 |
| 1.5.1 单链抗体在医学领域的应用 | 第20页 |
| 1.5.2 单链抗体在食品安全领域的应用 | 第20-21页 |
| 1.6 常用的免疫检测技术 | 第21-22页 |
| 1.6.1 Western印迹 | 第21页 |
| 1.6.2 酶联免疫吸附试验(enzymelinkedimmunosorbentassay;ELISA) | 第21-22页 |
| 1.7 选题依据及研究内容 | 第22-24页 |
| 第二章 广谱有机磷农药人工抗原的制备 | 第24-32页 |
| 2.1 实验仪器及材料 | 第24-25页 |
| 2.1.1 主要实验仪器 | 第24页 |
| 2.1.2 主要实验材料 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-26页 |
| 2.2.1 半抗原的合成 | 第25页 |
| 2.2.2 人工抗原的合成 | 第25-26页 |
| 2.2.2.1 活泼酯法合成包被抗原 | 第25-26页 |
| 2.2.2.2 混合酸酐法合成免疫原 | 第26页 |
| 2.2.3 人工抗原的鉴定 | 第26页 |
| 2.2.3.1 紫外分光光度法全波长扫描及偶联比测算 | 第26页 |
| 2.3 结果与分析 | 第26-28页 |
| 2.3.1 半抗原的合成与鉴定 | 第26-27页 |
| 2.3.2 人工合成抗原的鉴定 | 第27-28页 |
| 2.4 讨论 | 第28-31页 |
| 2.4.1 半抗原的设计 | 第28页 |
| 2.4.2 半抗原分子的合成方法 | 第28-29页 |
| 2.4.3 载体蛋白的选择 | 第29页 |
| 2.4.4 人工抗原的合成方法 | 第29-30页 |
| 2.4.5 人工抗原的鉴定方法 | 第30-31页 |
| 2.4.5.1 紫外分光光度法 | 第30页 |
| 2.4.5.2 核磁共振法 | 第30页 |
| 2.4.5.3 飞行质谱法 | 第30页 |
| 2.4.5.4 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第30-31页 |
| 2.5 本章小结 | 第31-32页 |
| 第三章 广谱有机磷农药单克隆抗体的制备及ELISA方法的建立 | 第32-53页 |
| 3.1 实验仪器及材料 | 第32-36页 |
| 3.1.1 主要实验仪器 | 第32-33页 |
| 3.1.2 主要实验药品及材料 | 第33-34页 |
| 3.1.3 主要溶液的配制 | 第34-35页 |
| 3.1.4 实验材料的前处理 | 第35-36页 |
| 3.2 实验方法 | 第36-43页 |
| 3.2.1 免疫实验动物及效果鉴定 | 第36-37页 |
| 3.2.1.1 建立免疫、采血方案 | 第36-37页 |
| 3.2.1.2 小鼠多抗血清效价测定及其对半抗原及不同农药的抑制情况 | 第37页 |
| 3.2.2 细胞融合 | 第37-39页 |
| 3.2.2.1 SP2/0的复苏及培养 | 第37-38页 |
| 3.2.2.2 制备饲养层细胞 | 第38页 |
| 3.2.2.3 融合用脾细胞的制备 | 第38-39页 |
| 3.2.2.4 细胞融合 | 第39页 |
| 3.2.3 融合后细胞的培养 | 第39-40页 |
| 3.2.4 杂交瘤细胞筛选及细胞亚克隆 | 第40页 |
| 3.2.5 体内诱生法制备单克隆抗体 | 第40页 |
| 3.2.6 辛酸-硫酸铵法粗纯化腹水抗体 | 第40页 |
| 3.2.7 ProteinG柱纯化抗体 | 第40-41页 |
| 3.2.8 抗体纯度鉴定 | 第41页 |
| 3.2.9 抗体亚型鉴定 | 第41-42页 |
| 3.2.10 确定抗体检测谱及对有机磷类农药的灵敏度鉴定 | 第42-43页 |
| 3.2.10.1 确定单克隆抗体与包被原的最佳工作浓度 | 第42页 |
| 3.2.10.2 确定单克隆抗体对有机磷农药的检测谱 | 第42页 |
| 3.2.10.3 确定单克隆抗体对半抗原的检测灵敏度 | 第42-43页 |
| 3.3 结果与分析 | 第43-49页 |
| 3.3.1 小鼠免疫效果鉴定 | 第43-44页 |
| 3.3.2 细胞融合及杂交瘤细胞培养 | 第44页 |
| 3.3.3 单克隆抗体纯化效果及抗体亚型鉴定 | 第44-45页 |
| 3.3.3.1 单克隆抗体纯化效果鉴定 | 第44-45页 |
| 3.3.3.2 单克隆抗体亚型鉴定 | 第45页 |
| 3.3.4 确定单克隆抗体与包被原的最佳工作浓度 | 第45页 |
| 3.3.5 确定单克隆抗体对有机磷农药的检测谱 | 第45-48页 |
| 3.3.6 确定单克隆抗体对半抗原的检测灵敏度 | 第48-49页 |
| 3.4 讨论 | 第49-52页 |
| 3.4.1 单克隆抗体制备过程中的一系列问题 | 第49-52页 |
| 3.5 本章小结 | 第52-53页 |
| 第四章 抗有机磷农药单链抗体的制备及ELISA方法的建立 | 第53-77页 |
| 4.1 实验仪器及材料 | 第53-55页 |
| 4.1.1 主要实验仪器 | 第53-54页 |
| 4.1.2 主要实验材料 | 第54-55页 |
| 4.1.3 培养基的配制 | 第55页 |
| 4.2 实验方法 | 第55-65页 |
| 4.2.1 所用引物的设计 | 第55页 |
| 4.2.2 提取细胞总RNA | 第55-56页 |
| 4.2.3 cDNA第一链的合成 | 第56页 |
| 4.2.4 cDNA的鉴定 | 第56-57页 |
| 4.2.5 抗体重、轻链基因的扩增 | 第57页 |
| 4.2.6 重、轻链可变区基因的克隆与鉴定 | 第57-59页 |
| 4.2.7 单链抗体基因的构建 | 第59-61页 |
| 4.2.7.1 SOE-PCR构建单链抗体(scFv)基因 | 第59-61页 |
| 4.2.8 单链抗体基因的克隆与鉴定 | 第61页 |
| 4.2.9 原核表达载体的构建 | 第61-63页 |
| 4.2.10 scFv在E.coliBL21(DE3)内的表达及纯化 | 第63页 |
| 4.2.10.1 最佳诱导温度的优化 | 第63页 |
| 4.2.10.2 最佳诱导浓度的优化 | 第63页 |
| 4.2.10.3 最佳诱导时间的优化 | 第63页 |
| 4.2.11 SDS-PAGE凝胶电泳法分析表达情况 | 第63页 |
| 4.2.12 周质蛋白的提取 | 第63页 |
| 4.2.13 目的蛋白的纯化 | 第63-64页 |
| 4.2.14 纯化后目的蛋白的处理 | 第64页 |
| 4.2.15 Westernblot(WB)分析目的蛋白 | 第64页 |
| 4.2.16 scFv活性鉴定 | 第64-65页 |
| 4.3 结果与分析 | 第65-75页 |
| 4.3.1 cDNA的鉴定 | 第65页 |
| 4.3.2 重、轻链可变区基因的扩增 | 第65-66页 |
| 4.3.3 T-A克隆后阳性菌落的鉴定及测序分析 | 第66-67页 |
| 4.3.4 scFv基因的构建 | 第67-68页 |
| 4.3.5 scFv基因的克隆及序列鉴定 | 第68页 |
| 4.3.6 原核表达体系的构建与表达 | 第68-72页 |
| 4.3.6.1 scFv原核表达载体的构建与鉴定 | 第68-70页 |
| 4.3.6.2 scFv在E.coliBL21(DE3)内的表达及纯化与鉴定 | 第70-72页 |
| 4.3.7 确定单链抗体scFv对有机磷农药的识别谱 | 第72-75页 |
| 4.4 讨论 | 第75页 |
| 4.5 本章小结 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-83页 |
| 在学期间的研究成果 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
