五种烟草病毒的多重RT-PCR检测技术研究
| 摘要 | 第7-8页 |
| ABSTRACT | 第8页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-28页 |
| 1.1 引言 | 第11-12页 |
| 1.2 烟草病毒的危害及五种主要病毒病的研究进展 | 第12-21页 |
| 1.2.1 烟草花叶病毒病的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.2.2 烟草黄瓜花叶病毒病的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.2.3 烟草马铃薯Y 病毒病的研究进展 | 第17-19页 |
| 1.2.4 烟草蚀纹病毒病的研究进展 | 第19-20页 |
| 1.2.5 烟草脉带花叶病毒病的研究进展 | 第20-21页 |
| 1.3 植物病毒病检测技术研究进展 | 第21-24页 |
| 1.3.1 枯斑和指示植物检测法 | 第21页 |
| 1.3.2 电子显微镜诊断 | 第21-22页 |
| 1.3.3 免疫学方法 | 第22-23页 |
| 1.3.4 分子生物学检测法 | 第23-24页 |
| 1.4 多重PCR 技术的研究进展 | 第24-26页 |
| 1.4.1 多重PCR 的应用 | 第24-25页 |
| 1.4.2 多重PCR 的技术要点 | 第25-26页 |
| 1.4.3 多重PCR 最新研究进展 | 第26页 |
| 1.5 本研究的目的、意义和技术路线 | 第26-28页 |
| 第二章 材料和方法 | 第28-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第28页 |
| 2.2 仪器和试剂耗材 | 第28页 |
| 2.2.1 仪器和试剂 | 第28页 |
| 2.2.2 溶液配置 | 第28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-32页 |
| 2.3.1 烟草病毒病害的田间调查 | 第28页 |
| 2.3.2 PCR 引物设计与筛选 | 第28-29页 |
| 2.3.3 烟草总核酸的提取 | 第29-30页 |
| 2.3.4 目标片段的克隆 | 第30-31页 |
| 2.3.5 重组质粒的鉴定 | 第31-32页 |
| 第三章 结果与分析 | 第32-39页 |
| 3.1 烟草病毒病害的田间调查结果 | 第32-35页 |
| 3.1.1 烟草花叶病毒病的田间调查 | 第32页 |
| 3.1.2 烟草黄瓜花叶病毒病的田间调查 | 第32-33页 |
| 3.1.3 烟草马铃薯Y 病毒病的田间调查 | 第33-34页 |
| 3.1.4 烟草蚀纹病毒病的田间调查 | 第34页 |
| 3.1.5 烟草脉带花叶病毒病的田间调查 | 第34-35页 |
| 3.2 RNA 的提取 | 第35页 |
| 3.3 单重PCR 检测结果 | 第35页 |
| 3.4 多重RT-PCR 检测结果 | 第35-36页 |
| 3.5 多重RT-PCR 检测体系的优化 | 第36-38页 |
| 3.5.1 引物和模板浓度的优化 | 第36页 |
| 3.5.2 多重RT-PCR 反应体系的优化 | 第36-37页 |
| 3.5.3 多重RT-PCR 扩增条件的优化 | 第37-38页 |
| 3.6 田间复合侵染病毒烟草的同步检测 | 第38页 |
| 3.7 PCR 产物序列分析 | 第38-39页 |
| 第四章 分析与结论 | 第39-40页 |
| 第五章 讨论 | 第40-42页 |
| 5.1 RNA 酶灭活对总RNA 提取效果的影响 | 第40页 |
| 5.2 引物设计和确定目标片段大小 | 第40页 |
| 5.3 反应体系和扩增条件的优化 | 第40-41页 |
| 5.4 进一步研究设想 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 作者简介 | 第48页 |
