| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 缩略词表 | 第13-15页 |
| 1 前言 | 第15-30页 |
| 1.1 自吞噬的发生过程及自吞噬体的形态特征 | 第15-16页 |
| 1.1.1 自吞噬的发生过程 | 第15-16页 |
| 1.1.2 自吞噬体的形态特征 | 第16页 |
| 1.2. 细胞自吞噬的分类及其作用机理 | 第16-18页 |
| 1.2.1 细胞自吞噬的分类 | 第16页 |
| 1.2.2 细胞自吞噬的作用机理 | 第16-18页 |
| 1.2.2.1 大自吞噬的作用机制 | 第17页 |
| 1.2.2.2 小自吞噬的作用机制 | 第17-18页 |
| 1.2.2.3 分子伴侣介导的自吞噬的作用机制 | 第18页 |
| 1.3. 细胞自吞噬的信号调控 | 第18-21页 |
| 1.3.1 雷帕霉素靶蛋白(target of rapamycin,TOR)信号对自吞噬的调控 | 第18-20页 |
| 1.3.2 磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3-kinases,PI3Ks)信号对自吞噬的调控 | 第20-21页 |
| 1.3.3 死亡相关蛋白激酶(death-associated protein kinase,DAPK)信号对自吞噬的调控 | 第21页 |
| 1.3.4 AMP激活的蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)信号对自吞噬的调控 | 第21页 |
| 1.4. 细胞自吞噬在生命活动中的作用 | 第21-23页 |
| 1.4.1 细胞自吞噬与营养稳态 | 第22页 |
| 1.4.2 细胞自吞噬与生长分化 | 第22页 |
| 1.4.3 细胞自吞噬与癌症 | 第22-23页 |
| 1.4.4 细胞自吞噬与病原体感染 | 第23页 |
| 1.5. 细胞自吞噬的研究方法 | 第23-24页 |
| 1.5.1 透射电子显微镜技术 | 第23页 |
| 1.5.2 Atg8/LC3及p62蛋白的表达检测 | 第23-24页 |
| 1.5.3 荧光显微镜技术 | 第24页 |
| 1.6. microRNAs | 第24-25页 |
| 1.7. microRNA介导营养素敏感的信号通路调控营养代谢 | 第25-27页 |
| 1.7.1 microRNA与mTOR信号通路 | 第25-26页 |
| 1.7.2 microRNA与PI3K信号通路 | 第26页 |
| 1.7.3 microRNA与AMPK信号通路 | 第26-27页 |
| 1.8. 细胞自吞噬、microRNA与亮氨酸 | 第27-28页 |
| 1.8.1 细胞自吞噬与microRNA | 第27页 |
| 1.8.2 亮氨酸与细胞自吞噬 | 第27-28页 |
| 1.9.本课题目的、意义及研究内容 | 第28-30页 |
| 2 材料和方法 | 第30-49页 |
| 2.1 试验材料 | 第30-35页 |
| 2.1.1 细胞系、菌种、质粒与载体 | 第30-32页 |
| 2.1.2 试验药品、试剂及试剂盒 | 第32-33页 |
| 2.1.3 培养基及其配制 | 第33页 |
| 2.1.4 试验缓冲液及其配制 | 第33-34页 |
| 2.1.5 仪器设备 | 第34页 |
| 2.1.6 技术服务、生物学软件及数据库 | 第34-35页 |
| 2.1.6.1 技术服务 | 第35页 |
| 2.1.6.2 生物学软件 | 第35页 |
| 2.1.6.3 主要数据库 | 第35页 |
| 2.2. 试验方法 | 第35-49页 |
| 2.2.1 C2C12成肌细胞中亮氨酸缺失诱导细胞自吞噬的检测 | 第35-41页 |
| 2.2.1.1 LAMP1-RFP融合表达质粒的构建 | 第35-38页 |
| 2.2.1.2 细胞培养主要方法 | 第38-39页 |
| 2.2.1.3 共聚焦显微镜观察LC3-GFP及LAMP1-RFP共定位 | 第39页 |
| 2.2.1.4 SDS-PAGE/蛋白质印迹检测自吞噬活性 | 第39-41页 |
| 2.2.1.5 流式细胞术检测亮氨酸缺失对C2C12成肌细胞周期的影响 | 第41页 |
| 2.2.2 C2C12成肌细胞亮氨酸缺失的microRNA表达变化检测 | 第41-45页 |
| 2.2.2.1 C2C12成肌细胞亮氨酸缺失的microRNA表达谱芯片分析 | 第41页 |
| 2.2.2.2 microRNA芯片结果的荧光定量PCR确认 | 第41-43页 |
| 2.2.2.3 C2C12肌细胞亮氨酸缺失诱导的microRNA表达谱变化 | 第43页 |
| 2.2.2.4 miR-20a及miR-106b转录因子的验证 | 第43-44页 |
| 2.2.2.5 miR-20a及miR-106b转录因子c-myc转录活性的验证 | 第44-45页 |
| 2.2.2.6 亮氨酸缺失处理的C2C12成肌细胞与肌细胞中c-myc的表达变化 | 第45页 |
| 2.2.3 miR-20a及miR-106b靶基因分析 | 第45-47页 |
| 2.2.3.1 miR-20a及miR-106b靶基因预测 | 第45-46页 |
| 2.2.3.2 miR-20a及miR-106b靶基因的验证 | 第46-47页 |
| 2.2.4 C2C12成肌细胞中miR-20a及miR-106b在亮氨酸缺失诱导自吞噬发生过程中的作用检测 | 第47-49页 |
| 2.2.4.1 亮氨酸缺失的C2C12成肌细胞中靶基因ULK1表达变化检测 | 第47页 |
| 2.2.4.2 C2C12成肌细胞中miR-20a及miR-106b在亮氨酸缺失诱导自吞噬发生过程中的作用检测 | 第47-49页 |
| 3 试验结果 | 第49-71页 |
| 3.1 C2C12成肌细胞中亮氨酸缺失诱导细胞自吞噬的活性 | 第49-54页 |
| 3.1.1 GFP-LC3及RFP-LAMP1融合蛋白表达质粒构建结果 | 第49-50页 |
| 3.1.2 C2C12成肌细胞中亮氨酸缺失诱导细胞自吞噬的活性的结果 | 第50-51页 |
| 3.1.3 SDS-PAGE/western blot检测亮氨酸缺失诱导C2C12细胞自吞噬的结果 | 第51-53页 |
| 3.1.4 亮氨酸缺失对C2C12成肌细胞周期影响的结果 | 第53-54页 |
| 3.2 C2C12成肌细胞与肌细胞亮氨酸缺失诱导的microRNA表达变化 | 第54-62页 |
| 3.2.1 C2C12细成肌胞亮氨酸缺失的microRNA表达谱芯片结果 | 第54-56页 |
| 3.2.2 亮氨酸缺失处理诱导C2C1成肌细胞与肌细胞中miR-20a及miR-106b的表达结果 | 第56-59页 |
| 3.2.3 miR-20a/miR-106b转录因子验证的结果 | 第59-60页 |
| 3.2.4 c-myc转录活性验证的结果 | 第60-61页 |
| 3.2.5 亮氨酸缺失处理的C2C12成肌细胞与肌细胞c-myc的表达变化 | 第61-62页 |
| 3.3 miR-20a/miR-106b靶基因分析结果 | 第62-65页 |
| 3.3.1 ULK1-psiCHECK2质粒构建结果 | 第62-63页 |
| 3.3.2 双荧光素酶报告基因试验验证miR-20a/miR-106b靶向ULK1的结果 | 第63页 |
| 3.3.3 miR-20a/miR-106b超表达对ULK1表达影响的结果 | 第63-65页 |
| 3.4 miR-20a/miR-106b在亮氨酸缺失诱导C2C12成肌细胞自吞噬发生过程中的作用 | 第65-71页 |
| 4 讨论 | 第71-77页 |
| 4.1 microRNA在细胞自吞噬调控中的作用 | 第71页 |
| 4.2 miR-20a/miR-106b的生物学功能 | 第71-72页 |
| 4.3 受亮氨酸调节的microRNA | 第72页 |
| 4.4 亮氨酸在细胞自吞噬与细胞周期调节中的作用 | 第72-74页 |
| 4.5 ULK1在细胞自吞噬调节中的作用 | 第74-75页 |
| 4.6 c-myc调节microRNA与细胞自吞噬 | 第75-77页 |
| 5 小结 | 第77-79页 |
| 5.1 本研究主要结论 | 第77-78页 |
| 5.2 本研究的特色与创新点 | 第78页 |
| 5.3 值得进一步研究的问题 | 第78-79页 |
| 在读期间发表论文 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
