| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略语表 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-25页 |
| 1.1 固氮基因 | 第10-12页 |
| 1.1.1 nif基因 | 第10-11页 |
| 1.1.2 fix基因 | 第11-12页 |
| 1.2 固氮基因调控机制 | 第12-19页 |
| 1.2.1 nifA调控 | 第12-16页 |
| 1.2.1.1 NifA蛋白结构 | 第12页 |
| 1.2.1.2 nifA基因表达调控 | 第12-16页 |
| 1.2.2 FixL-FixJ调控系统 | 第16-17页 |
| 1.2.3 FixK调控 | 第17页 |
| 1.2.4 RpoN(σ~(54))调控 | 第17-18页 |
| 1.2.5 NtrBC和NtrYX调控系统 | 第18-19页 |
| 1.3 sRNA及其调控模式 | 第19-24页 |
| 1.3.1 ncRNA概述 | 第19-20页 |
| 1.3.1.1 ncRNA的分类与功能 | 第19-20页 |
| 1.3.2 sRNA | 第20-21页 |
| 1.3.3 sRNA功能 | 第21-22页 |
| 1.3.4 sRNA调控模式 | 第22页 |
| 1.3.4.1 DsrA、RprA的上调模式 | 第22页 |
| 1.3.4.2 RyhB的下调模式 | 第22页 |
| 1.3.5 sRNA研究技术 | 第22-24页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-29页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第25-26页 |
| 2.1.2 抗生素 | 第26页 |
| 2.1.3 缓冲液与试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.4 培养基 | 第27-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-34页 |
| 2.2.1 分子生物学基本操作 | 第29页 |
| 2.2.2 TAIL-PCR(Thermal Asymmetric Interlace PCR,热不对称交错PCR) | 第29-31页 |
| 2.2.3 SOE-PCR | 第31页 |
| 2.2.4 本研究所用引物 | 第31页 |
| 2.2.5 双交换突变株筛选 | 第31-32页 |
| 2.2.6 植物盆栽 | 第32页 |
| 2.2.7 固氮酶活测定 | 第32页 |
| 2.2.9 根瘤菌类菌体总RNA提取 | 第32-33页 |
| 2.2.10 荧光定量PCR | 第33页 |
| 2.2.11 DNA和sRNA序列分析 | 第33-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-51页 |
| 3.1 共生固氮基因mhk-RGS1的发现 | 第34-35页 |
| 3.2 RGS1的克隆与序列分析 | 第35-37页 |
| 3.2.1 TAIL-PCR克隆RGS1 | 第35页 |
| 3.2.2 RGS1的序列分析 | 第35-37页 |
| 3.3 7653R菌株RGS1基因插入失活突变体的构建及筛选 | 第37-42页 |
| 3.3.1 PCR扩增L端、R端、Km序列 | 第37-38页 |
| 3.3.2 SOE-PCR反应获得插入突变目的片段 | 第38页 |
| 3.3.3 置换载体的构建 | 第38-40页 |
| 3.3.4 突变体菌株的筛选 | 第40-42页 |
| 3.4 突变体菌株的共生表型 | 第42-44页 |
| 3.5 突变体形成根瘤的电镜观察和石蜡切片 | 第44-45页 |
| 3.6 RGS1下游基因的表达验证 | 第45-46页 |
| 3.7 RGS1在紫云英根瘤中的表达量检测 | 第46-47页 |
| 3.8 RGS1启动子预测及分析 | 第47-49页 |
| 3.9 RGS1转录操纵单元分析 | 第49-51页 |
| 4 讨论与展望 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-58页 |
| 附录 | 第58-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
