| 目录 | 第5-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 縮略词表 | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第13-24页 |
| 1.1 研究问题的由来 | 第13-14页 |
| 1.2 文献综述 | 第14-23页 |
| 1.2.1 转基因动物的研究进展 | 第14页 |
| 1.2.2 转基因动物的研究方法 | 第14-16页 |
| 1.2.3 转基因动物的检测 | 第16-17页 |
| 1.2.4 哺乳动物体细胞核移植技术的研究进展 | 第17-20页 |
| 1.2.5 体细胞核移植技术在实际生产中的应用及存在的问题 | 第20-21页 |
| 1.2.6 HOXA10基因的研究进展 | 第21-23页 |
| 1.3 本研究的目的及意义 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-36页 |
| 2.1 材料 | 第24-28页 |
| 2.1.1 卵巢来源 | 第24页 |
| 2.1.2 质粒、菌株 | 第24页 |
| 2.1.3 主要试剂和配制 | 第24-26页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第26页 |
| 2.1.5 主要分子生物学软件和在线分析工具 | 第26页 |
| 2.1.6 主要引物信息 | 第26-28页 |
| 2.2 研究方法 | 第28-36页 |
| 2.2.1 本研究技术路线 | 第28页 |
| 2.2.2 猪HOXA10基因雌激素诱导启动子载体质粒的制备 | 第28-29页 |
| 2.2.3 PCR扩增、纯化及克隆测序 | 第29-30页 |
| 2.2.4 大白猪胎儿成纤维细胞系的建立 | 第30-31页 |
| 2.2.5 转HOXA10基因细胞系的建立 | 第31-33页 |
| 2.2.6 转HOXA10基因克隆胚胎的制备 | 第33-34页 |
| 2.2.7 转HOXA10基因克隆胚胎的移植 | 第34-35页 |
| 2.2.8 克隆猪的分子生物学鉴定 | 第35-36页 |
| 3 结果 | 第36-57页 |
| 3.1 雌激素诱导型载体pc3.1-HOXA10-DNA质粒酶切鉴定及线性化处理 | 第36-37页 |
| 3.2 大白猪胎儿成纤维细胞系的建立 | 第37-40页 |
| 3.2.1 大白猪胎儿成纤维细胞的原代培养 | 第37-38页 |
| 3.2.2 大白猪胎儿成纤维细胞的传代培养与纯化 | 第38-39页 |
| 3.2.3 大白猪胎儿成纤维细胞来源的性别鉴定 | 第39页 |
| 3.2.4 大白猪胎儿成纤维细胞生长曲线的测定结果 | 第39-40页 |
| 3.3 转HOXA10基因细胞系的建立 | 第40-45页 |
| 3.3.1 脂质体介导的细胞转染 | 第40-42页 |
| 3.3.2 大白猪胎儿成纤维细胞对G418敏感性试验结果 | 第42-44页 |
| 3.3.3 单克隆细胞分子生物学鉴定 | 第44-45页 |
| 3.4 转HOXA10基因克隆胚胎的构建 | 第45-52页 |
| 3.4.1 猪卵母细胞的体外成熟培养 | 第45-46页 |
| 3.4.2 供体细胞细胞周期的测定结果 | 第46-48页 |
| 3.4.3 转HOXA10基因克隆胚胎的构建与发育 | 第48-50页 |
| 3.4.4 供体细胞的胚胎发育鉴定 | 第50页 |
| 3.4.5 转HOXA10基因重构胚的移植 | 第50-52页 |
| 3.5 克隆猪的分子生物学鉴定 | 第52-57页 |
| 3.5.1 克隆猪的PCR检测 | 第52-53页 |
| 3.5.2 Real-time PCR检测克隆猪转入载体的拷贝数 | 第53-55页 |
| 3.5.3 染色体步移检测克隆猪转入载体的插入位点 | 第55-57页 |
| 4 讨论 | 第57-61页 |
| 4.1 供体细胞的选择与培养 | 第57页 |
| 4.2 转HOXA10基因细胞系的建立 | 第57-58页 |
| 4.3 转HOXA10基因重构胚胎的建立 | 第58-59页 |
| 4.3.1 卵母细胞的体外培养 | 第58-59页 |
| 4.3.2 供体细胞细胞周期的确定 | 第59页 |
| 4.4 重构胚的移植与克隆猪的鉴定 | 第59-61页 |
| 5 小结 | 第61-63页 |
| 5.1 本研究的主要结果与结论 | 第61页 |
| 5.2 本研究的创新点与特色 | 第61-62页 |
| 5.3 本研究的不足之处及下一步工作建议 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
