| 摘要 | 第7-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略语表 | 第13-16页 |
| 1 前言 | 第16-23页 |
| 1.1 立题依据 | 第16-17页 |
| 1.2 喹赛多促生长作用的研究现状 | 第17-18页 |
| 1.3 GH合成调控的研究进展 | 第18-20页 |
| 1.4 Egr1研究概况 | 第20-21页 |
| 1.5 研究内容和目标 | 第21-23页 |
| 2 材料方法 | 第23-42页 |
| 2.1 细胞株 | 第23页 |
| 2.2 主要试剂 | 第23-25页 |
| 2.3 主要仪器 | 第25-26页 |
| 2.4 主要试剂的配制 | 第26-28页 |
| 2.5 细胞培养及冻存 | 第28-29页 |
| 2.6 喹赛多和信号通路抑制剂对Egr1和GH mRNA表达的影响 | 第29-31页 |
| 2.6.1 喹赛多(2μM)作用不同时间对Egr1mRNA表达的影响 | 第29-30页 |
| 2.6.2 不同抑制剂对喹赛多诱导的GHmRNA表达的影响 | 第30-31页 |
| 2.6.3 PD98059对喹赛多诱导的Egr1mRNA表达的影响 | 第31页 |
| 2.7 Egr1干扰 | 第31-34页 |
| 2.7.1 siRNA干扰片段的设计与合成 | 第31-32页 |
| 2.7.2 检测转染效率-转染荧光标记的siRNA(FAM-siRNA) | 第32-33页 |
| 2.7.3 利用阴性对照和阳性对照优化转染条件 | 第33页 |
| 2.7.4 甲基化Egr1-siRNA转染GH3细胞 | 第33-34页 |
| 2.8 Egr1干扰对相关基因mRNA表达的影响 | 第34-37页 |
| 2.8.1 细胞总RNA的提取 | 第34页 |
| 2.8.2 总RNA的纯度及完整性检测 | 第34页 |
| 2.8.3 反转录合成cDNA | 第34-35页 |
| 2.8.4 实时荧光定量PCR检测目的基因mRNA表达水平 | 第35-37页 |
| 2.9 Egr1干扰对相关蛋白表达的影响 | 第37-41页 |
| 2.9.1 细胞蛋白提取 | 第37页 |
| 2.9.2 蛋白浓度测定 | 第37-38页 |
| 2.9.3 SDS-PAGE电泳 | 第38-39页 |
| 2.9.4 转膜 | 第39-40页 |
| 2.9.5 免疫反应 | 第40页 |
| 2.9.6 化学发光、定影 | 第40-41页 |
| 2.10 数据分析 | 第41-42页 |
| 3 结果 | 第42-56页 |
| 3.1 GH3细胞培养 | 第42页 |
| 3.2 细胞总RNA浓度及完整性 | 第42-43页 |
| 3.3 引物可靠性 | 第43-45页 |
| 3.3.1 熔解曲线和标准曲线 | 第43-45页 |
| 3.3.2 PCR产物验证 | 第45页 |
| 3.4 喹赛多和信号通路抑制剂对GH mRNA表达的影响 | 第45-47页 |
| 3.5 喹赛多调控Egr1 mRNA表达的时效关系 | 第47-48页 |
| 3.6 喹赛多和PD98059对Egr1 mRNA表达的影响 | 第48页 |
| 3.7 细胞转染 | 第48-52页 |
| 3.7.1 干扰条件的确定 | 第48-51页 |
| 3.7.2 三条Egr1-siRNA的筛选 | 第51-52页 |
| 3.8 Egr1与GH mRNA表达之间的关系 | 第52-54页 |
| 3.9 Egr1基因与其他显著差异基因之间的关系 | 第54-56页 |
| 4 讨论 | 第56-64页 |
| 4.1 喹赛多通过AC/PKA、Jak/PI3K、Ras/ERK信号通路调控GH mRNA合成 | 第56-57页 |
| 4.2 Egr1在喹赛多调控GH mRNA合成中可能起桥梁作用 | 第57-58页 |
| 4.3 Egr1与其他差异基因之间存在互相调控的网络调节方式 | 第58-62页 |
| 4.4 MAPK/ERK1/2信号通路在喹赛多发挥药理效应中扮演重要角色 | 第62-64页 |
| 5 全文总结 | 第64-66页 |
| 6 文献综述:抗菌药改善动物生长性能的研究进展 | 第66-77页 |
| 6.1 前言 | 第66页 |
| 6.2 抗菌药改善动物生长性能的作用和应用现状 | 第66-67页 |
| 6.3 抗菌药改善生长性能的原理研究 | 第67-76页 |
| 6.3.1 对肠道微生态的调节作用 | 第68-69页 |
| 6.3.2 对肠壁结构的改善作用 | 第69-70页 |
| 6.3.3 对机体内分泌系统的影响 | 第70-76页 |
| 6.4 结语 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
| 作者简介 | 第97-98页 |
| 附录 | 第98-108页 |
