| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 缩写词中英文对照 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-20页 |
| 1.1 2型糖尿病的研究进展 | 第15页 |
| 1.2 广西巴马小型猪2型糖尿病动物模型 | 第15-16页 |
| 1.3 HSL基因简介 | 第16-17页 |
| 1.4 HSL的生物学功能 | 第17-18页 |
| 1.5 HSL与2型糖尿病的关系 | 第18-19页 |
| 1.6 脂代谢相关基因功能简介 | 第19页 |
| 1.7 本研究的目的意义 | 第19-20页 |
| 第二章 广西巴马小型猪HSL及其相关基因的表达分析 | 第20-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-21页 |
| 2.1.1 试验样品 | 第20页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第20页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-24页 |
| 2.2.1 检测广西巴马小型猪血清的生化指标 | 第21页 |
| 2.2.2 广西巴马小型猪组织总RNA的提取和cDNA合成 | 第21-23页 |
| 2.2.3 实时荧光定量PCR检测HSL基因的表达 | 第23-24页 |
| 2.2.4 数据统计分析 | 第24页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第24-28页 |
| 2.3.1 血清生理生化指标及胰岛素水平 | 第24-25页 |
| 2.3.2 组织总RNA提取结果 | 第25-26页 |
| 2.3.3 HSL基因的组织表达谱分析 | 第26页 |
| 2.3.4 皮下脂HSL基因及脂肪代谢分化相关基因的相对表达结果 | 第26-27页 |
| 2.3.5 胰腺组织HSL基因和INS基因的相对表达结果 | 第27-28页 |
| 2.4 讨论 | 第28-30页 |
| 2.5 小结 | 第30-31页 |
| 第三章 广西巴马小型猪HSL基因的克隆、生物信息学分析及慢病毒载体的构建 | 第31-47页 |
| 3.1 实验材料 | 第31-33页 |
| 3.1.1 试验样品 | 第31页 |
| 3.1.2 载体及菌株 | 第31页 |
| 3.1.3 主要试剂及仪器 | 第31-32页 |
| 3.1.4 试剂的配制 | 第32-33页 |
| 3.2 实验方法 | 第33-37页 |
| 3.2.1 广西巴马小型猪皮下脂总RNA反转录为cDNA | 第33-34页 |
| 3.2.2 引物的设计与合成 | 第34页 |
| 3.2.3 PCR扩增HSL基因 | 第34页 |
| 3.2.4 目的片段与pMD18-T载体连接 | 第34页 |
| 3.2.5 pMD18-T-HSL重组质粒的转化 | 第34-35页 |
| 3.2.6 pMD18-T-HSL重组质粒的鉴定 | 第35页 |
| 3.2.7 广西巴马小型猪HSL基因的生物信息学分析 | 第35-36页 |
| 3.2.8 pMD18-T-HSL重组质粒和慢病毒载体PLV的双酶切 | 第36页 |
| 3.2.9 双酶切产物的胶回收纯化 | 第36页 |
| 3.2.10 T4连接 | 第36-37页 |
| 3.2.11 PLV-HSL重组慢病毒载体质粒的转化 | 第37页 |
| 3.2.12 PLV-HSL重组慢病毒载体质粒的鉴定 | 第37页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第37-45页 |
| 3.3.1 PCR扩增HSL基因的结果 | 第37-38页 |
| 3.3.2 pMD18-T-HSL重组质粒鉴定结果 | 第38-39页 |
| 3.3.3 HSL基因的序列及生物信息学分析 | 第39-43页 |
| 3.3.4 pMD18-T-HSL和PLV双酶切结果 | 第43-44页 |
| 3.3.5 PLV-HSL重组质粒鉴定结果 | 第44-45页 |
| 3.4 讨论 | 第45-46页 |
| 3.5 小结 | 第46-47页 |
| 第四章 过表达HSL对3T3-L1细胞和βTC-6细胞的影响 | 第47-62页 |
| 4.1 实验材料 | 第47-48页 |
| 4.1.1 细胞来源 | 第47页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第47-48页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第48页 |
| 4.1.4 试剂的配制 | 第48页 |
| 4.2 实验方法 | 第48-52页 |
| 4.2.1 PLV-HSL和PLV去内毒素质粒的提取 | 第48页 |
| 4.2.2 3T3-L1和βTC-6细胞的复苏、冻存与传代培养 | 第48-49页 |
| 4.2.3 重组质粒转染3T3-L1和βTC-6细胞 | 第49-50页 |
| 4.2.4 收集细胞提取总RNA反转录为cDNA | 第50页 |
| 4.2.5 实时荧光定量PCR | 第50-51页 |
| 4.2.6 检测转染3T3-L1细胞后培养基的TG含量 | 第51页 |
| 4.2.7 ELISA检测转染βTC-6细胞后培养基的胰岛素浓度 | 第51-52页 |
| 4.3 实验结果及分析 | 第52-58页 |
| 4.3.1 去内毒素质粒的检测 | 第52页 |
| 4.3.2 转染前细胞形态观察 | 第52页 |
| 4.3.3 细胞转染结果 | 第52-54页 |
| 4.3.4 转染3T3-L1细胞后诱导细胞分化结果 | 第54-55页 |
| 4.3.5 转染3T3-L1细胞后各基因相对表达结果 | 第55-56页 |
| 4.3.6 转染βTC-6细胞HSL基因和INS基因的相对表达结果 | 第56-57页 |
| 4.3.7 3T3-L1细胞培养基的TG含量测定结果 | 第57-58页 |
| 4.3.8 βTC-6细胞培养基的胰岛素浓度测定结果 | 第58页 |
| 4.4 讨论 | 第58-60页 |
| 4.5 小结 | 第60-62页 |
| 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 附录 | 第69-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第74页 |
