| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4-5页 |
| 中英缩略词表 | 第9-10页 |
| 第1章 前言 | 第10-12页 |
| 第2章 材料与方法 | 第12-32页 |
| 2.1 材料 | 第12页 |
| 2.1.1 实验细胞 | 第12页 |
| 2.2 主要实验试剂和耗材 | 第12-13页 |
| 2.3 配制实验试剂 | 第13-15页 |
| 2.4 重要的实验设备仪器 | 第15-16页 |
| 2.5 细胞培养 | 第16-19页 |
| 2.5.1 细胞原代培养 | 第16页 |
| 2.5.2 细胞传代培养 | 第16-17页 |
| 2.5.3 细胞培养换液 | 第17-18页 |
| 2.5.4 细胞冻存 | 第18页 |
| 2.5.5 细胞复苏 | 第18-19页 |
| 2.6 miRNA-25质粒转染OA软骨细胞 | 第19页 |
| 2.7 提取细胞总RNA和聚合酶链反应（PCR） | 第19-22页 |
| 2.7.1 细胞总RNA的提取 | 第19-20页 |
| 2.7.2 RNA逆转录为cDNA | 第20-21页 |
| 2.7.3 梯度PCR反应试验，选取最佳退火时间 | 第21-22页 |
| 2.7.4 RT-qPCR检测miR-25、Col2a1、ACAN、TNF-α、MMP-13的mRNA表达水平 | 第22页 |
| 2.8 细胞蛋白提取和利用Western blot检测Col2a1、ACAN、TNF-α、MMP-13蛋白表达水平 | 第22-25页 |
| 2.8.1 细胞总蛋白的提取 | 第22-23页 |
| 2.8.2 BCA法测定提取的蛋白浓度 | 第23页 |
| 2.8.3 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第23-25页 |
| 2.9 免疫组织化学分析 | 第25-26页 |
| 2.10 SD大鼠膝骨关节模型制作和原代提取OA软骨细胞 | 第26-28页 |
| 2.10.1 SD大鼠膝关节OA模型制作 | 第26页 |
| 2.10.2 OA关节炎组织病理检测以及量化评价 | 第26-27页 |
| 2.10.3 原代OA软骨细胞以及正常软骨细胞培养 | 第27页 |
| 2.10.4 甲苯胺蓝染色软骨细胞 | 第27-28页 |
| 2.11 OA软骨细胞转染miRNA-25后检测Col2a1、ACAN、TNF-α、MMP-13的mRNA和蛋白质水平 | 第28-29页 |
| 2.11.1 合成miRNA-25 | 第28页 |
| 2.11.2 细胞转染 | 第28页 |
| 2.11.3 miR-25转染细胞24h后通过qPCR检测Col2a1、ACAN、TNF-α、MMP-13的mRNA水平变化 | 第28-29页 |
| 2.11.4 miR-25转染细胞48h后通过Western blot检测Col2a1、ACAN、TNF-α、MMP-13蛋白质水平变化 | 第29页 |
| 2.12 OA软骨细胞转染miRNA-25后检测软骨细胞细胞凋亡率和细胞增殖率变化 | 第29-31页 |
| 2.12.1 转染后软骨细胞凋亡率变化 | 第29-30页 |
| 2.12.2 转染后软骨细胞增殖率变化 | 第30-31页 |
| 2.13 数据统计分析 | 第31-32页 |
| 第3章 结果 | 第32-42页 |
| 3.1 评估SD大鼠OA模型及原代软骨细胞的鉴定 | 第32-34页 |
| 3.1.1 软骨组织染色结果观察 | 第32-33页 |
| 3.1.2 免疫组织化学结果观察 | 第33-34页 |
| 3.1.3 原代培养的软骨细胞甲苯胺蓝染色 | 第34页 |
| 3.2 miR-25转染OA软骨细胞 | 第34-42页 |
| 3.2.1 mi R-25转染软骨细胞后显微镜下观察和PCR检测mi R-25表达水平 | 第34-35页 |
| 3.2.2 IL-1β促进OA软骨细胞上调miR-25表达水平 | 第35-37页 |
| 3.2.4 OA软骨细胞中miR-25促进蛋白多糖和Ⅱ型胶原蛋白合成的调节作用 | 第37-38页 |
| 3.2.5 miR-25介导IL-1β促进OA疾病相关炎性细胞因子合成 | 第38-39页 |
| 3.2.6 miRNA-25对IL-1β促进软骨细胞凋亡和抑制细胞增殖调节作用 | 第39-42页 |
| 第4章 讨论 | 第42-44页 |
| 第5章 结论 | 第44-45页 |
| 第6章 不足与展望 | 第45-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-50页 |
| 综述 MicroRNA在骨性关节炎中的研究进展 | 第50-60页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
